日本血吸蟲病是種危害嚴重的人畜共患疾病，對人類健康和社會經(jīng)濟發(fā)展存在不利影響。高效、安全的抗血吸蟲病疫苗的研制是實現(xiàn)控制、消滅血吸蟲病的有效途徑。輻照致弱血吸蟲尾蚴和童蟲疫苗（RAV）能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生高保護性效應(yīng)，但不適于直接應(yīng)用，所以通過模擬RAV誘導(dǎo)的高保護性效應(yīng)機制研發(fā)安全可靠的疫苗可能是解決血防難題的策略之，而RAV免疫原性分子和細胞基礎(chǔ)及機制的研究是探索RAV高保護性效應(yīng)機制的切入點之。RAV免疫可誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生以Th1為優(yōu)勢免疫應(yīng)答的抗攻擊感染效果，而正常尾蚴則不能誘導(dǎo)這種保護性效應(yīng)。宿主對RAV的應(yīng)答模式可能與蟲體特征性抗原表達及宿主特征性的先天和獲得性免疫應(yīng)答相關(guān)。高遷移率族蛋白B1（HMGB1）是種保守的內(nèi)源性核內(nèi)蛋白，在受到某些刺激后，HMGB1分子可以轉(zhuǎn)到細胞外發(fā)揮生物學(xué)作用。多項研究表明，HMGB1與宿主感染性免疫反應(yīng)有關(guān)，可以介導(dǎo)宿主樹突狀細胞（DCs）成熟和誘導(dǎo)T細胞向Th1型極化。因此，我們推測在RAV模型中，蟲體細胞的凋亡壞死及蟲源性HMGB1應(yīng)急分子等在誘導(dǎo)高保護性效應(yīng)方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用。因此，本研究初步比較了SjHMGB1在正常日本血吸蟲不同發(fā)育階段蟲體... 

【文章來源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
第一章 緒論
    1.1 血吸蟲的生物學(xué)概述
        1.1.1 血吸蟲及其分布
        1.1.2 日本血吸蟲的生活史
        1.1.3 血吸蟲與宿主的相互作用
    1.2 血吸蟲疫苗的研究進展
        1.2.1 血吸蟲疫苗研究的意義
        1.2.2 輻照致弱血吸蟲疫苗研究進展
        1.2.3 輻照致弱血吸蟲尾蚴疫苗的作用機制
    1.3 HMGB1 分子的生物學(xué)特性
        1.3.1 HMGB1 分子的結(jié)構(gòu)和功能特征
        1.3.2 HMGB1 的免疫生物學(xué)功能
    1.4 細胞凋亡與壞死
        1.4.1 常用檢測方法
        1.4.2 血吸蟲的細胞凋亡研究
        1.4.3 細胞的免疫原性死亡
第二章 SjHMGB1 的原核表達及其免疫原性分析
    2.1 實驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 主要試劑和儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 SjHMGB1 引物設(shè)計和目的片段擴增
        2.2.2 pET28a(+)-SjHMGB1 重組載體的構(gòu)建
        2.2.3 SjHMGB1 重組蛋白的表達
        2.2.4 SjHMGB1 蛋白的表達純化
        2.2.5 SjHMGB1 蛋白的鑒定
        2.2.6 SjHMGB1 蛋白的免疫原性分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 SjHMGB1 基因的克隆和重組載體鑒定
        2.3.2 SjHMGB1 蛋白的表達
        2.3.3 SjHMGB1 重組蛋白的純化和鑒定
        2.3.4 SjHMGB1 重組蛋白免疫原性鑒定
    2.4 討論
第三章 SjHMGB1 蛋白在日本血吸蟲中的表達研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 相關(guān)試劑和儀器
        3.1.2 釘螺和實驗動物
    3.2 實驗方法
        3.2.1 不同發(fā)育階段日本血吸蟲蟲體收集
        3.2.2 切片制備
        3.2.3 SjHMGB1 在不同時期蟲體中的分布
    3.3 實驗結(jié)果
    3.4 討論
第四章 SjHMGB1 在桿狀病毒表達系統(tǒng)中的表達
    4.1 實驗材料
        4.1.1 載體、細胞和菌種
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 引物設(shè)計
        4.2.2 pFastBacHTA-SjHMGB1 轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建
        4.2.3 重組穿梭質(zhì)粒 Bacmid-SjHMGB1 的構(gòu)建和鑒定
        4.2.4 重組 Bacmid-SjHMGB1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 Sf9 昆蟲細胞
        4.2.5 間接免疫熒光檢測重組 SjHMGB1 蛋白在 Sf9 細胞中的表達
        4.2.6 SjHMGB1 重組蛋白的純化和鑒定
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 pFastBacHTA-SjHMGB1 轉(zhuǎn)移載體的構(gòu)建
        4.3.2 重組穿梭質(zhì)粒 pFastBacHTA-SjHMGB1 的構(gòu)建和鑒定
        4.3.3 SjHMGB1 重組蛋白在 Sf9 中的表達鑒定
    4.4 討論
第五章 SjHMGB1 活化 DC 表型成熟的研究
    5.1 實驗材料
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 實驗試劑及耗材
        5.1.3 儀器設(shè)備
    5.2 實驗方法
        5.2.1 制備 BMDC
        5.2.2 SjHMGB1 刺激 BMDC
        5.2.3 流式細胞術(shù)檢測 BMDC 表型成熟
    5.3 實驗結(jié)果
    5.4 討論
第六章 輻照致弱日本血吸蟲的凋亡壞死研究
    6.1 實驗材料
        6.1.1 實驗動物
        6.1.2 主要試劑和和耗材
        6.1.3 實驗儀器
        6.1.4 溶液配制
    6.2 實驗方法
        6.2.1 尾蚴的收集與處理
        6.2.2 不同時期血吸蟲凋亡與壞死的超微結(jié)構(gòu)觀察
        6.2.3 不同時期童蟲細胞的凋亡檢測
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 不同時期血吸蟲凋亡與壞死的超微結(jié)構(gòu)觀察
        6.3.2 流式細胞儀檢測不同時期童蟲細胞的凋亡情況
    6.4 討論
第七章 全文總結(jié)
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]日本血吸蟲鈣網(wǎng)織蛋白活化抗原提呈細胞功能的分析[D]. 李瑩.上海師范大學(xué) 2012
[3]日本血吸蟲童蟲期抗原分子的篩選及其Th細胞表位的鑒定[D]. 趙犇鵬.上海師范大學(xué) 2011



本文編號：3334421