為了檢測牛奶中腸出血性大腸桿菌（enterohemrrhagic Escherichia coil, EHEC）O157:H7污染,采用兔多抗作為捕捉抗體與一株O157:H7單克隆抗體作為檢測抗體進(jìn)行配對,構(gòu)建了針對EHEC O157:H7的雙抗夾心化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫檢測方法。該方法最低檢測限可達(dá)到2.5×10⁴ CFU/mL,優(yōu)于ELISA檢測方法,且特異性良好,與其他大腸桿菌、沙門菌、李斯特菌、阪崎腸桿菌等均無交叉反應(yīng)。在用于牛奶樣本的模擬添加檢測中,較ELISA方法可縮短前增菌處理時間。本研究為牛奶中O157:H7污染檢測提供了一種準(zhǔn)確度高、特異性強的檢測手段。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

ELISA特異性試驗結(jié)果

棋盤滴定法各條件組合P/N值

為探索CLEIA方法的最低檢測限,將EHEC O157:H7純培養(yǎng)菌液梯度稀釋為10～108CFU/mL進(jìn)行CLEIA試驗,結(jié)果發(fā)現(xiàn),P/N=2.1時菌液濃度在104～105CFU/mL的范圍內(nèi),因此再次設(shè)置104、2.5×104、5×104及105CFU/mL 4個濃度梯度進(jìn)行試驗,結(jié)果如圖2所示。當(dāng)菌液濃度為2.5×104CFU/mL時,其P/N均值為2.55,接近且大于2.1,因此可認(rèn)為該CLEIA方法的最低檢測限為2.5×104CFU/mL。同時進(jìn)行的ELISA試驗,當(dāng)菌液濃度為105CFU/mL時,P/N均值為2.37,因此認(rèn)為其最低檢測限為105CFU/mL。CLEIA和ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3、圖4所示。隨著菌液濃度的升高,化學(xué)發(fā)光值和OD450也相應(yīng)地升高,其中CLEIA方法在2.5×104CFU/mL～108CFU/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系,方程式為y=189 100x-736 700,R2=0.993 0;ELISA方法在105CFU/mL～108CFU/mL范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。綜上所述,CLEIA方法在靈敏度方面優(yōu)于ELISA方法。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]雙抗體夾心ELISA法檢測食品中出血性大腸桿菌O15[J]. 黃海燕,陳亮,陳萍.  食品工業(yè)科技. 2016(11)
[2]雙抗夾心ELISA檢測食品中大腸桿菌O157:H7方法研究[J]. 葛萃萃,鐘青萍,張旺,歐陽鑫.  食品科學(xué). 2007(01)

碩士論文
[1]基于HCR及生物素—鏈霉親和素信號放大系統(tǒng)檢測大腸桿菌O157:H7的研究[D]. 郭琦.南昌大學(xué) 2017



本文編號：3331904