雞白痢沙門菌是宿主（禽）適應(yīng)性病原菌,既能水平傳播又能垂直傳播,易導(dǎo)致雛雞的高致病性和高死亡率,易對(duì)禽養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,因此雞白痢在我國(guó)種禽場(chǎng)是優(yōu)先防控和重點(diǎn)防治的主要疾病之一。但是,當(dāng)前雞白痢沙門菌檢疫淘汰的防控措施在我國(guó)未能達(dá)到預(yù)期效果,希冀研發(fā)新型疫苗和藥物等措施,以盡早實(shí)現(xiàn)我國(guó)種禽場(chǎng)雞白痢沙門菌凈化。脂多糖是沙門菌的重要致病因子,其合成基因是研發(fā)新型疫苗和藥物的靶基因。脂多糖由類脂A、核心多糖和O抗原構(gòu)成,其中O抗原的結(jié)構(gòu)變異是光滑型和粗糙型轉(zhuǎn)換的基礎(chǔ),但在雞白痢沙門菌致病機(jī)制中研究較少。因此,為尋找脂多糖生物合成基因,本研究應(yīng)用信號(hào)標(biāo)簽突變技術(shù)建立雞白痢沙門菌轉(zhuǎn)座突變庫(kù),通過(guò)玻板凝集試驗(yàn)篩選與O9單抗不發(fā)生玻板凝集的粗糙型突變株,并對(duì)其免疫生物學(xué)特性進(jìn)行初步分析,進(jìn)一步了解脂多糖合成基因?qū)﹄u白痢沙門菌致病性的效應(yīng)。1.粗糙型雞白痢沙門菌的篩選及其功能基因鑒定應(yīng)用轉(zhuǎn)座突變技術(shù)構(gòu)建雞白痢沙門菌S06004轉(zhuǎn)座突變庫(kù),利用O9單克隆抗體與粗糙型沙門菌不發(fā)生玻板凝集的現(xiàn)象進(jìn)行高通量篩選,并通過(guò)吖啶橙方法予以驗(yàn)證。從10,022株突變株中篩選得到4株粗糙型突變株,PCR擴(kuò)增轉(zhuǎn)座... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１沙門菌感染不同的細(xì)胞和器官（Ｌａｈｉｒｉｅｔａｌ．，２０１０）??Ｆｉｇ．?１?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｅｌｌｓ?ａｎｄ?ｏｒｇａｎｓ?（Ｌａｈｉｒｉ?ｅｔ?ａｌ．，?２０１０）??

ＪＬ－１８??／?…．．?．．．Ｔ．．．．．．＿?ｒｅｔｅａｓｅ??Ｉ?ｒＴｊ?（ＮＦ－ｋＢ：?（ＡＰ－１Ｊ??；丫一ｒ??？ｆＦ２ａ?Ａｎｔｉ－ａｐｏｐｔＯｌｉｃ?Ｐｒ〇－ｉｎｆｉ＊ｍｍａｔ〇ｒｙ??ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ?ｆａｃｔｏｒｓ?ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ??？?八?？??Ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?／?Ｖ?Ｐｒｏ－ａｐｏｐＣｏｔｉｃ??ｅｆｆｅｃｔ?＼、、、?ｅｆｆｅｃｔ??？?＞?ｒ??Ｃａｓｐａｓｅ?３??ｔ??Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ??圖２革蘭陰性菌致巨噬細(xì)胞死亡的途徑（ＧｕｉｎｅｙＤ．Ｇ．，２００５）??Ｆｉｇ．?２?Ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ?ｂｙ?Ｇｒａｍ－ｎｅｇａｔｉｖｅ?（Ｇｕｉｎｅｙ?Ｄ．Ｇ．，?２００５）??４脂多糖的研究進(jìn)展??脂多糖（圖３）是沙門菌細(xì)胞壁外膜的重要組成部分，主要由類脂Ａ、核心多糖和??０抗原構(gòu)成，在菌株的致病性中起著重要作用（Ｈｉｃｋｓ?ａｎｄ?Ｊｉａ，?２０１８）。??４．１脂多糖的結(jié)構(gòu)??４．１．１類脂Ａ??類脂Ａ是脂多糖的保守脂質(zhì)成分，將ＬＰＳ固定在外膜上，由兩個(gè)葡糖胺連接多個(gè)??脂肪酸。目前，大腸桿菌的脂多糖合成己被研究清楚，其合成途徑、轉(zhuǎn)運(yùn)途徑與大多??數(shù)革蘭陰性菌相似。脂質(zhì)Ａ的生物合成是由九種酶（ＬｐｘＡ、ＬｐｘＣ、ＬｐｘＤ、ＬｐｘＨ、ＬｐｘＢ、??ＬｐｘＫ、ＫｄｔＡ、ＬｐｘＬ、ＬｐｘＭ）催化的，需要三種不同的蛋白結(jié)合的�；w底物以及??ＵＤＰ－乙酰葡萄糖胺（ＵＤＰ－ＧｌｃＮＡｃ）、ＡＴＰ?和?ＣＭＰ－Ｋｄｏ?（ＸｉａｏＸ．?ｅｔａｌ．，２０１７）。首先??通過(guò)ＬｐｘＡ、ＬｐｘＣ、Ｌｐｘ

ｙｉｘｏ＿ｐ＾??＾４ｉｌｌ?Ｉ?Ｌ．??、?ＰａｇＬ?｛??｛??ＰａｇＰ??Ｊ??圖３鼠傷寒沙門菌ＬＰＳ的結(jié)構(gòu)（ＥｍｓｔＲ．Ｋ．ｅｔａｌ．，２００】）??Ｆｉｇ．?３?Ｃｈｅｍｉｃａｌ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｉＳａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｗｎ?ＬＰＳ?（Ｅｒｎｓｔ?Ｒ．Ｋ．?ｅｔ?ａｌ．，?２００１）??Ｗｚｖ＊ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?ＡＢＣ＾ｅｐｅｎｄｅｎｉ??ｆ?ｆ?ｆ?？?ｆ??環(huán)曾’ｉ?響＂；??ｉ?！仇?ｉ?Ｉ?Ｐ３？ｉ?ｉ?ｉ??？?〇?〇??圖４?Ｏ抗原不同的合成途徑??（ＧＴ：糖基轉(zhuǎn)移酶，［Ｏ］表示Ｏ抗原的重復(fù)單位，Ｓ：?jiǎn)蝹�(gè)糖單位（ＢｅｒｔａｎｉａｎｄＲｕｉｚ，２０１８））??Ｆｉｇ．?４?Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙｓ?ｏｆ?Ｏ－ａｎｔｉｇｅｎ??（ＧＴ：?ｆｏｒ?ｇｌｙｃｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，?［０］：?ａ?ｒｅｐｅａｔｉｎｇ?ｕｎｉｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?０?ａｎｔｉｇｅｎ，?Ｓ：?ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ?ｓｕｇａｒ?ｕｎｉｔｓ?（Ｂｅｒｔａｎｉ??ａｎｄ?Ｒｕｉｚ，?２０１８））??４．２脂多糖的基因合成??參與ＬＰＳ生物合成的相關(guān)基因主要集中在細(xì)菌基因組上的３個(gè)區(qū)段內(nèi)，最初命名??為ｒ／ａ基因簇、ｒ／Ｚ＞基因簇以及ｒ／Ｃ區(qū)段（焦揚(yáng)，２０１８）。９個(gè)基因參與類脂Ａ合成，１３??個(gè)基因與核心多糖合成相關(guān)的，２８?jìng)�(gè)基因涉及Ｏ－抗原組裝和聚合（郭榮顯，２０１９）。??吩基因簇（ｗａｆｌ區(qū)）主要編碼核心多糖（圖５），大腸桿菌Ｋ－１２代表了第一個(gè)完??整測(cè)序的ｗｍ區(qū)，在很大程度上依賴于沙門菌突變株的ＬＰＳ結(jié)構(gòu)和ＬＰＳ特異性噬菌體??６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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