一株豬源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定及耐藥性、耐藥基因的檢測
發(fā)布時間：2021-08-07 20:09
為了確定發(fā)病母豬組織是否感染病原菌及調(diào)查病原菌耐藥情況,試驗對發(fā)病母豬組織進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng),經(jīng)過培養(yǎng)觀察、生化試驗、16S rRNA測序確定分離菌株,對分離菌株進(jìn)行藥敏試驗、小鼠致病性試驗、耐藥基因檢測、常見血清型分型及毒力基因檢測。結(jié)果表明:分離得到一株肺炎克雷伯氏菌。分離菌株的16S rRNA測序結(jié)果與NCBI上18株肺炎克雷伯氏菌參考菌株序列同源性均在99%以上。分離菌株接種在血瓊脂培養(yǎng)基上會發(fā)生α溶血現(xiàn)象,且具有多重耐藥性,攜帶四環(huán)素類tet耐藥基因,氨基糖苷類aph（3′）-Ia、strA、strB耐藥基因,磺胺類sul 1、sul 2耐藥基因及超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBL）耐藥基因blaSHV,與耐藥表型結(jié)果一致。分離菌株血清型分型為K20型,含有ureA、wabG、uge毒力基因。在小鼠致病性試驗中,以濃度為6.15×108cfu/mL的菌液進(jìn)行攻毒,能夠使小鼠在22 h內(nèi)死亡,表明分離菌株對小鼠具有致病性。說明本試驗所分離得到的豬源肺炎克雷伯氏菌具有嚴(yán)重的耐藥性和強(qiáng)致病性。
【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(06)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
圖1 分離菌株16S rRNA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果
根據(jù)藥敏試驗結(jié)果,通過PCR擴(kuò)增得到四類七種耐藥基因,即四環(huán)素類(tet A)耐藥基因、氨基糖苷類[aph(3′)-Ia、strA、strB]耐藥基因、磺胺類(sul 1、sul 2)耐藥基因以及β-內(nèi)酰胺類(blaSHV)耐藥基因,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物,結(jié)果見圖2�；厥�1～6號泳道的目的條帶并測序,測序結(jié)果經(jīng)過同源性比對分析發(fā)現(xiàn),各耐藥基因與GenBank上的參考序列(登錄號:MH745929.1、CP028480.1、CP031883.1、CP025966.2、CP032227.1、CP032176.1、MH745930.1、CP022926.1、CP025636.1、CP020061.1、CP019160.1、MH715960.1、CP028389.2)同源性均達(dá)到99%以上。構(gòu)建進(jìn)化樹分析(結(jié)果見圖3),發(fā)現(xiàn)分離菌株攜帶的耐藥基因與各參考序列親緣關(guān)系相近,具有非常高的相似度,均屬于同一分支,表明該菌株所攜帶的耐藥基因序列比較保守。圖3 分離菌株耐藥基因與參考序列進(jìn)化樹
圖3 分離菌株耐藥基因與參考序列進(jìn)化樹
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]3株水貂源致病性肺炎克雷伯氏菌的鑒定與耐藥性分析[J]. 肖麗榮,周琦,張召興,李巧玲,高桂生,賈青輝,史秋梅. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(22)
[2]羊源肺炎克雷伯氏菌的分離與鑒定[J]. 謝宇舟,吳翠蘭,李軍,陶立,李常挺,彭昊,馬春霞,潘艷. 今日畜牧獸醫(yī). 2018(01)
[3]一例肺炎克雷伯氏菌引起山羊死亡診斷報告[J]. 黃宇,何宏勇,李軍,段振華,甘一波,唐第深,吳翠蘭,閉炳芬,潘艷. 中國畜禽種業(yè). 2018(01)
[4]一株牛源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定與耐藥基因型檢測[J]. 蒙正群,冷依伊,任梅滲,劉亞東,王印,姚學(xué)萍,楊澤曉. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2017(04)
[5]牛源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析[J]. 馮娜,高翔,肖敏,寧建剛,邢小勇,包世俊. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2016(11)
[6]豬源肺炎克雷伯菌的分離鑒定[J]. 林星宇,王印,楊澤曉,姚學(xué)萍,胡凌,彭善珍,陳平,鄔旭龍. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2015(05)
[7]肺炎克雷伯氏菌強(qiáng)毒株的分離鑒定及16-23SrRNAITS序列分析[J]. 李富祥,李華春,趙德宏,王娟,姚俊,廖德芳,熊和麗,宋建領(lǐng),胡騎. 中國畜牧獸醫(yī). 2015(02)
[8]10種常見細(xì)菌基因檢測膜條的研制[J]. 朱飛舟,陳利玉,劉新發(fā),田奇,談成,歐陽方丹,吳正理,陳漢春. 微生物學(xué)雜志. 2011(04)
碩士論文
[1]貂源肺炎克雷伯氏菌血清型和毒力基因的檢測及其致病性研究[D]. 王建莉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌體的分離鑒定及其對小鼠菌血癥的治療研究[D]. 路榮.吉林大學(xué) 2013
本文編號：3328457
【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(06)北大核心
【文章頁數(shù)】：6 頁
【部分圖文】：
圖1 分離菌株16S rRNA基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果
根據(jù)藥敏試驗結(jié)果,通過PCR擴(kuò)增得到四類七種耐藥基因,即四環(huán)素類(tet A)耐藥基因、氨基糖苷類[aph(3′)-Ia、strA、strB]耐藥基因、磺胺類(sul 1、sul 2)耐藥基因以及β-內(nèi)酰胺類(blaSHV)耐藥基因,1%瓊脂糖凝膠電泳檢測擴(kuò)增產(chǎn)物,結(jié)果見圖2�；厥�1～6號泳道的目的條帶并測序,測序結(jié)果經(jīng)過同源性比對分析發(fā)現(xiàn),各耐藥基因與GenBank上的參考序列(登錄號:MH745929.1、CP028480.1、CP031883.1、CP025966.2、CP032227.1、CP032176.1、MH745930.1、CP022926.1、CP025636.1、CP020061.1、CP019160.1、MH715960.1、CP028389.2)同源性均達(dá)到99%以上。構(gòu)建進(jìn)化樹分析(結(jié)果見圖3),發(fā)現(xiàn)分離菌株攜帶的耐藥基因與各參考序列親緣關(guān)系相近,具有非常高的相似度,均屬于同一分支,表明該菌株所攜帶的耐藥基因序列比較保守。圖3 分離菌株耐藥基因與參考序列進(jìn)化樹
圖3 分離菌株耐藥基因與參考序列進(jìn)化樹
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]3株水貂源致病性肺炎克雷伯氏菌的鑒定與耐藥性分析[J]. 肖麗榮,周琦,張召興,李巧玲,高桂生,賈青輝,史秋梅. 黑龍江畜牧獸醫(yī). 2018(22)
[2]羊源肺炎克雷伯氏菌的分離與鑒定[J]. 謝宇舟,吳翠蘭,李軍,陶立,李常挺,彭昊,馬春霞,潘艷. 今日畜牧獸醫(yī). 2018(01)
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[4]一株牛源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定與耐藥基因型檢測[J]. 蒙正群,冷依伊,任梅滲,劉亞東,王印,姚學(xué)萍,楊澤曉. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2017(04)
[5]牛源肺炎克雷伯氏菌的分離鑒定及遺傳進(jìn)化分析[J]. 馮娜,高翔,肖敏,寧建剛,邢小勇,包世俊. 中國獸醫(yī)科學(xué). 2016(11)
[6]豬源肺炎克雷伯菌的分離鑒定[J]. 林星宇,王印,楊澤曉,姚學(xué)萍,胡凌,彭善珍,陳平,鄔旭龍. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2015(05)
[7]肺炎克雷伯氏菌強(qiáng)毒株的分離鑒定及16-23SrRNAITS序列分析[J]. 李富祥,李華春,趙德宏,王娟,姚俊,廖德芳,熊和麗,宋建領(lǐng),胡騎. 中國畜牧獸醫(yī). 2015(02)
[8]10種常見細(xì)菌基因檢測膜條的研制[J]. 朱飛舟,陳利玉,劉新發(fā),田奇,談成,歐陽方丹,吳正理,陳漢春. 微生物學(xué)雜志. 2011(04)
碩士論文
[1]貂源肺炎克雷伯氏菌血清型和毒力基因的檢測及其致病性研究[D]. 王建莉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]NDM-1肺炎克雷伯菌裂解性噬菌體的分離鑒定及其對小鼠菌血癥的治療研究[D]. 路榮.吉林大學(xué) 2013
本文編號：3328457
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