水貂阿留申病分子流行病學(xué)調(diào)查和間接ELISA檢測(cè)方法的建立
發(fā)布時(shí)間:2021-08-06 23:39
水貂阿留申。ˋleutian Mink Disease, AD)是由細(xì)小病毒科(Parvoviridae)細(xì)小病毒亞科(Parvovirinae)阿留申病毒屬(Amdovirus)水貂阿留申病毒(Aleutian Mink Disease Virus, AMDV)引起的慢性傳染病。該病能夠?qū)е赂腥緞?dòng)物腎小球腎炎、動(dòng)脈血管炎和代謝異常,廣泛存在于世界各水貂養(yǎng)殖國(guó)家,造成重大的經(jīng)濟(jì)損失,是水貂養(yǎng)殖業(yè)的三大疫病之一。近年來(lái),由于我國(guó)水貂養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大和養(yǎng)殖密度的提高,養(yǎng)殖方式較為原始及AD的防范力度不夠等原因,導(dǎo)致AD在我國(guó)水貂養(yǎng)殖地區(qū)廣泛流行且有擴(kuò)大的趨勢(shì)。國(guó)內(nèi)缺乏AD流行病學(xué)的詳細(xì)研究資料,致使AD的致病機(jī)理等研究滯后。目前還沒(méi)有預(yù)防AD的疫苗,國(guó)際上普遍使用對(duì)流免疫電泳(Counterimmunoelectrophoresis, CIEP)技術(shù)來(lái)定期檢測(cè)篩查AD并淘汰病貂凈化貂群。但CIEP法繁瑣,很難在短時(shí)間內(nèi)完成大量樣品的篩查。隨著基層養(yǎng)殖市場(chǎng)對(duì)AD篩查的逐漸重視,急需建立一種高通量、高靈敏度的AD診斷方法。本研究首先對(duì)國(guó)內(nèi)主要水貂養(yǎng)殖地區(qū)進(jìn)行AD分子流行病學(xué)調(diào)查。共收集五個(gè)主要...
【文章來(lái)源】:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】:64 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
樣品采集養(yǎng)殖場(chǎng)所在區(qū)域
AMM-Utah-1-kit S 1.. 19<i2圖2. 2 DNAStar軟件對(duì)34株序列的氨基酸對(duì)比分析,只顯示出不同的氨基酸位點(diǎn)。Fig.2.2 Alignment of the amino acid sequences of the AMDV VP2 protein found in 34 AMDV samples. Only theamino acids that differ from the consensus sequence are shown.2.3.3系統(tǒng)分析
圖3.7表達(dá)產(chǎn)物的Western-blot檢測(cè)Fig3.7 Westem-blot test for expressed proteinHis標(biāo)簽單抗為一抗,HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠的IgG為二抗;B:以感染水紹阿留申病毒的病紹陽(yáng)性血清為,以HRP標(biāo)記的兔抗紹的丨gG為二抗;M:預(yù)染的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn);1:重組桿狀病毒感染的sf9細(xì)胞的蛋白;2:阿留申病毒商業(yè)抗原;3:正常sf9細(xì)胞蛋白;Immunoblot analysis with Anti-His Tag mouse monoclonal antibody and goat anti-mouse IgG-HRP; B: Immunoblotysis with a pool of infected mink by ADV and rabbit anti-mink IgG-HRP as antibody; M: molecular weight markers: Total lysates of sf9 cells infected recombinant baculovirus: 2: Commercial antigen of ADV; 3: uninfected sf9 cells8重組蛋白與商業(yè)抗原的CIEP對(duì)比試驗(yàn)用表達(dá)蛋白作為檢測(cè)抗原進(jìn)行CIEP試驗(yàn),分別以水紹的AMDV陽(yáng)性血清(60份),AMDV血清(20份),以及AMDV陰性MEV陽(yáng)性血清(20份)為檢測(cè)對(duì)象,與AMDV商業(yè)抗原對(duì)比,每組均設(shè)重復(fù)。對(duì)重組蛋白與商此抗原的特異性、重復(fù)性和敏感性及穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證。。8. 1重組蛋白與商業(yè)抗原的特異性和重復(fù)性試驗(yàn)將重組蛋白作為檢測(cè)抗原進(jìn)行CIEP試驗(yàn),分別以水紹的AMDV陽(yáng)性血清(60份),AMDV
本文編號(hào):3326704
【文章來(lái)源】:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市
【文章頁(yè)數(shù)】:64 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
樣品采集養(yǎng)殖場(chǎng)所在區(qū)域
AMM-Utah-1-kit S 1.. 19<i2圖2. 2 DNAStar軟件對(duì)34株序列的氨基酸對(duì)比分析,只顯示出不同的氨基酸位點(diǎn)。Fig.2.2 Alignment of the amino acid sequences of the AMDV VP2 protein found in 34 AMDV samples. Only theamino acids that differ from the consensus sequence are shown.2.3.3系統(tǒng)分析
圖3.7表達(dá)產(chǎn)物的Western-blot檢測(cè)Fig3.7 Westem-blot test for expressed proteinHis標(biāo)簽單抗為一抗,HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠的IgG為二抗;B:以感染水紹阿留申病毒的病紹陽(yáng)性血清為,以HRP標(biāo)記的兔抗紹的丨gG為二抗;M:預(yù)染的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn);1:重組桿狀病毒感染的sf9細(xì)胞的蛋白;2:阿留申病毒商業(yè)抗原;3:正常sf9細(xì)胞蛋白;Immunoblot analysis with Anti-His Tag mouse monoclonal antibody and goat anti-mouse IgG-HRP; B: Immunoblotysis with a pool of infected mink by ADV and rabbit anti-mink IgG-HRP as antibody; M: molecular weight markers: Total lysates of sf9 cells infected recombinant baculovirus: 2: Commercial antigen of ADV; 3: uninfected sf9 cells8重組蛋白與商業(yè)抗原的CIEP對(duì)比試驗(yàn)用表達(dá)蛋白作為檢測(cè)抗原進(jìn)行CIEP試驗(yàn),分別以水紹的AMDV陽(yáng)性血清(60份),AMDV血清(20份),以及AMDV陰性MEV陽(yáng)性血清(20份)為檢測(cè)對(duì)象,與AMDV商業(yè)抗原對(duì)比,每組均設(shè)重復(fù)。對(duì)重組蛋白與商此抗原的特異性、重復(fù)性和敏感性及穩(wěn)定性進(jìn)行驗(yàn)證。。8. 1重組蛋白與商業(yè)抗原的特異性和重復(fù)性試驗(yàn)將重組蛋白作為檢測(cè)抗原進(jìn)行CIEP試驗(yàn),分別以水紹的AMDV陽(yáng)性血清(60份),AMDV
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