發(fā)布時(shí)間：2021-08-06 13:26

　　犬瘟熱（Canine distemper, CD）是由犬瘟熱病毒（Canine distemper virus，CDV）感染引起食肉科動(dòng)物死亡的急性、高度接觸性傳染病。近年來，隨著全球環(huán)境變化、動(dòng)物棲息地的人為頻繁干預(yù)及病毒的進(jìn)化，CDV的自然宿主已由傳統(tǒng)的犬科、浣熊科和鼬科擴(kuò)大到貓科、靈貓科等所有陸地食肉科動(dòng)物，此外也有偶蹄目、海豹和非人靈長類自然感染CDV的報(bào)道。CDV給全球動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)和生物多樣性帶來極大損失和危害的同時(shí)，其社會(huì)公共危害性越來越受到人們重視。傳代細(xì)胞系上缺少CDV病毒受體，人工分離培養(yǎng)病毒十分困難，導(dǎo)致人們對病毒的病原學(xué)與免疫研究認(rèn)知較其它病毒而言發(fā)展相對緩慢，特別是在免疫預(yù)防方面一直沿用上世紀(jì)50年代研制的CDV。因此，當(dāng)前構(gòu)建高效分離CDV的敏感細(xì)胞系，建立病毒的反向遺傳操作平臺(tái)，分離研究當(dāng)前流行犬瘟熱野毒株的特性，分析野毒株與商業(yè)疫苗毒株抗原蛋白分子特性及抗原蛋白差異，開展有效安全成本低廉犬用疫苗或佐劑的研制具有重大意義，對預(yù)防控制國內(nèi)犬瘟熱疫情蔓延具有重要現(xiàn)實(shí)意義。I表達(dá)犬瘟熱病毒SLAM受體的敏感細(xì)胞系構(gòu)建及其病毒的分離與鑒定鑒于傳統(tǒng)的CDV分離培養(yǎng)方法有... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
第一篇 緒論
    1.1 犬瘟熱概述
        1.1.1 犬瘟熱病毒
        1.1.2 病毒分離培養(yǎng)
        1.1.3 病毒蛋白
        1.1.4 致病機(jī)理和臨床特征
        1.1.5 流行病學(xué)
        1.1.6 犬瘟熱疫苗研究現(xiàn)狀
        1.1.7 犬瘟熱病毒感染性克隆研究現(xiàn)狀
    1.2 犬瘟熱病毒受體研究進(jìn)展
        1.2.1 信號淋巴細(xì)胞激活分子
        1.2.2 Nectin-4
        1.2.3 其他受體
        1.2.4 總結(jié)
    1.3 白細(xì)胞介素 18 研究進(jìn)展
        1.3.1 IL-18 的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 IL-18 分子結(jié)構(gòu)
        1.3.3 IL-18 基因及基因調(diào)節(jié)
        1.3.4 IL-18 產(chǎn)生和遞呈
        1.3.5 IL-18 的生物學(xué)功能
        1.3.6 IL-18 對宿主免疫保護(hù)作用
        1.3.7 展望
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 表達(dá)犬瘟熱病毒 SLAM 受體的敏感細(xì)胞系構(gòu)建及病毒分離與鑒定
        1.1 材料方法
            1.1.1 病料、質(zhì)粒和細(xì)胞
            1.1.2 主要試劑與儀器
            1.1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
            1.1.4 真核表達(dá)載體構(gòu)建
            1.1.5 表達(dá) SLAM 蛋白 Vero 細(xì)胞系的構(gòu)建
            1.1.6 RT-PCR 方法鑒定 SLAM/Vero 細(xì)胞系
            1.1.7 間接免疫熒光方法鑒定
            1.1.8 流式細(xì)胞檢測 SLAM/Vero 細(xì)胞系
            1.1.9 猴源和犬源 CDV 的分離與鑒定
            1.1.10 病毒在 SLAM／Vero 細(xì)胞生長特性研究
        1.2 結(jié)果
            1.2.1 真核表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.2.2 SLAM/Vero 細(xì)胞系的構(gòu)建與鑒定
            1.2.3 利用 Vero/DogSLAM 細(xì)胞系分離犬瘟熱病毒
            1.2.4 犬源 CDV 和猴源 CDV 對不同動(dòng)物 SLAM 受體利用比較分析
        1.3 討論
        1.4 小結(jié)
    第二章 現(xiàn)行不同疫苗株犬瘟熱病毒免疫效果評價(jià)及其 H 蛋白基因特性分析研究
        2.1 材料與方法
            2.1.1 疫苗毒株、細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞、質(zhì)粒與單克隆抗體
            2.1.2 主要試劑與儀器
            2.1.3 不同疫苗株 CDV 在犬和狐貍體內(nèi)免疫效果評價(jià)
            2.1.4 引物的設(shè)計(jì)與合成
            2.1.5 RT-PCR 克隆 4 株疫苗株 CDV 的 H 基因
            2.1.6 CDV H 基因序列分析
            2.1.7 真核表達(dá)載體構(gòu)建
            2.1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.1.9 間接免疫熒光檢測
            2.1.10 犬瘟熱病毒 H 蛋白三維構(gòu)象建立
        2.2 結(jié)果
            2.2.1 不同疫苗株 CDV 在犬和狐貍體內(nèi)免疫效果評估
            2.2.2 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
            2.2.3 不同毒株 H 基因核苷酸及其對應(yīng)的氨基酸同源性比較
            2.2.4 H 基因系統(tǒng)發(fā)生進(jìn)化樹分析
            2.2.5 H 基因氨基酸序列分析結(jié)果
            2.2.6 犬瘟熱病毒 H 蛋白糖基化位點(diǎn)分析
            2.2.7 野生株和疫苗株犬瘟熱病毒 H 蛋白同源模型構(gòu)建及比較
        2.3 討論
        2.4 小結(jié)
    第三章 表達(dá)白細(xì)胞介素 18 的重組犬瘟熱病毒感染性克隆構(gòu)建與初步應(yīng)用
        3.1 材料方法
            3.1.1 病毒株，質(zhì)粒和細(xì)胞
            3.1.2 主要試劑與儀器
            3.1.3 引物的設(shè)計(jì)與合成
            3.1.4 感染性克隆載體的構(gòu)建
            3.1.5 病毒的拯救
            3.1.6 RT-PCR 及測序鑒定
            3.1.7 Western blotting 鑒定
            3.1.8 重組病毒的培養(yǎng)與滴定
            3.1.9 重組病毒生長動(dòng)力學(xué)研究
            3.1.10 IL-18 的生物活性評估
        3.2 結(jié)果
            3.2.1 表達(dá)犬 IL-18 基因的重組真核表達(dá)載體構(gòu)建
            3.2.2 不同載體體系表達(dá)的 IL-18 活性評定
            3.2.3 粘附人 IL-2 信號肽的犬或鼠 IL-18 的重組犬瘟熱病毒載體構(gòu)建
            3.2.4 重組病毒的拯救及其鑒定
            3.2.5 Western blotting 鑒定重組病毒
            3.2.6 重組病毒生長動(dòng)力學(xué)研究
            3.2.7 重組病毒分泌 IL-18 的生物活性能力檢測
        3.3 討論
        3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
導(dǎo)師簡介
作者簡介
攻讀博士期間所得的科研成果
致謝



本文編號：3325859