目的:本實(shí)驗(yàn)以小鼠和小鼠巨噬細(xì)胞為材料,使用布魯氏菌疫苗株M5對(duì)其進(jìn)行侵染,在不同的時(shí)間對(duì)小鼠的巨噬細(xì)胞、血清以及不同組織中的一氧化氮（NO）和非對(duì)稱(chēng)性二甲基精氨酸（ADMA）含量進(jìn)行檢測(cè),比較不同時(shí)間和不同組織內(nèi)NO和ADMA含量的的差異,探討NO和ADMA在此過(guò)程中所起的作用,以及NO與ADMA之間在時(shí)間和空間上的響應(yīng)關(guān)系。最后進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)觀察,為進(jìn)一步研究其引起吞噬細(xì)胞免疫應(yīng)答的開(kāi)始和布病預(yù)防尋求新途徑提供一定依據(jù)和理論支持。方法:1.收集培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期的布魯氏菌疫苗株M5菌液,離心重懸后用麥?zhǔn)媳葷岱▽⒕合♂屩了璧臐舛?用布魯氏菌疫苗株M5侵染小鼠巨噬細(xì)胞,侵染時(shí)細(xì)菌和細(xì)胞比例為100:1,在0.5h、6h、12h、24h和48h時(shí)分別取細(xì)胞培養(yǎng)液和細(xì)胞裂解物,采用Griess試劑法和酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)外的NO和ADMA含量,而后對(duì)各個(gè)侵染時(shí)間段進(jìn)行CFU計(jì)數(shù)觀察。把檢測(cè)結(jié)果輸入到EXCEL中,實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析使用SPSS 17.0。2.用1中的方法培養(yǎng)布魯氏菌疫苗株M5,用布魯氏菌M5和PBS緩沖液分別對(duì)侵染組和對(duì)照組小鼠進(jìn)行腹腔注射,注射劑量為0.2 ... 

【文章來(lái)源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 布魯氏菌簡(jiǎn)介
        1.1.1 布魯氏菌的歷史
        1.1.2 布魯氏菌病的流行狀況
        1.1.3 布魯氏菌的生物分類(lèi)
        1.1.4 布魯氏菌胞內(nèi)寄生
        1.1.5 布魯氏菌M5
        1.1.6 布魯氏菌的致病機(jī)制
        1.1.7 人畜共患傳染病
        1.1.8 布魯氏菌病
    1.2 一氧化氮（NO）
        1.2.1 NO的發(fā)現(xiàn)和生物學(xué)特性
        1.2.2 NO的合成
        1.2.3 NO的研究進(jìn)展
    1.3 非對(duì)稱(chēng)性二甲基精氨酸（ADMA）
        1.3.1 ADMA的合成
        1.3.2 ADMA的代謝
        1.3.3 ADMA的研究現(xiàn)狀
    1.4 研究目的和意義
    1.5 技術(shù)路線
第二章 布魯氏菌M5侵染小鼠巨噬細(xì)胞的NO與ADMA檢測(cè)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器
        2.1.1 菌種和細(xì)胞系
        2.1.2 主要試劑和儀器
    2.2 方法
        2.2.1 試劑配制
        2.2.2 小鼠巨噬細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 布魯氏菌M5侵染小鼠巨噬細(xì)胞
        2.2.4 LPS最適濃度測(cè)定
        2.2.5 NO、ADMA含量檢測(cè)與計(jì)算
        2.2.6 布魯氏菌侵染小鼠巨噬細(xì)胞M5的CFU（colony-forming unit)計(jì)數(shù)
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 小鼠巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)和布魯氏菌侵染前菌量
        2.3.2 LPS最適濃度測(cè)定結(jié)果
        2.3.3 NO檢測(cè)結(jié)果
        2.3.4 ADMA測(cè)定結(jié)果
        2.3.5 CFU計(jì)數(shù)觀察結(jié)果
    2.4 結(jié)論
第三章 布魯氏菌M5侵染小鼠的NO與ADMA檢測(cè)
    3.1 材料和儀器
        3.1.1 菌種和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要試劑和儀器
    3.2 方法
        3.2.1 布魯氏菌的培養(yǎng)和菌量計(jì)數(shù)
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫
        3.2.3 樣品采集和處理
        3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)試管凝集試驗(yàn)(SAT)
        3.2.5 虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)
        3.2.6 NO、ADMA含量檢測(cè)與計(jì)算
        3.2.7 小鼠肝臟和脾臟的CFU計(jì)數(shù)
        3.2.8 M5的CFU菌落鑒定
        3.2.9 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 試管凝集試驗(yàn)
        3.3.2 虎紅平板凝集試驗(yàn)
        3.3.3 NO檢測(cè)結(jié)果
        3.3.4 ADMA檢測(cè)結(jié)果
        3.3.5 小鼠肝脾CFU計(jì)數(shù)
        3.3.6 CFU單菌落PCR鑒定
    3.4 結(jié)論
第四章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師評(píng)閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]一氧化氮與病毒感染研究進(jìn)展[J]. 孫雷,孔小明.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2003(01)
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[7]一氧化氮的生物醫(yī)學(xué)[J]. 王逸民.  臨床檢驗(yàn)雜志. 1998(01)
[8]值得注意的布氏菌病疫情發(fā)展趨勢(shì)[J]. 尚德秋.  中國(guó)地方病學(xué)雜志. 1995(04)
[9]布氏桿菌羊種M5—90弱毒菌苗對(duì)新疆孕綿羊的安全性試驗(yàn)[J]. 宋之先,朱鶴賜,胡振武,武志強(qiáng),方金城,王學(xué)智,陳少平.  中國(guó)畜禽傳染病. 1988(06)
[10]布氏桿菌羊種M5-90菌苗對(duì)山西土種黃牛二年免疫期試驗(yàn)[J]. 施宏武,赫崇禮,陳乃昌,武志強(qiáng),劉玉梅,胡振武,王志國(guó),郝福文,刁富杰,段志昌,王維生,郭志勤,王金堂.  中國(guó)畜禽傳染病. 1988(02)

博士論文
[1]非對(duì)稱(chēng)二甲基精氨酸（ADMA）對(duì)糖尿病紅細(xì)胞變形能力及胰島素抵抗的影響[D]. 楊芝春.中南大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3325250