哺乳動物毛色主要取決于黑色素沉積,而黑色素生成主要受黑色素細胞調控,黑色素細胞產(chǎn)生不同種類的黑色素,以及這些色素的不同分布致使哺乳動物形成多種毛色類型。在現(xiàn)代毛兔和皮兔產(chǎn)業(yè)中,白色被毛在制成服裝等制品前需染色,給環(huán)境和消費者健康造成影響,而純天然的彩色被毛不會存在此問題,也更受消費者青睞。要解決這個問題,勢必要深入解析家兔被毛色素沉積機理,為毛色改造和新型毛色品種培育提供理論依據(jù)。然而目前,兔的永生化黑色素細胞系至今尚未建立,導致兔的毛色形成機制和黑色素沉積機理研究滯后。本研究圍繞家兔黑色素細胞永生化細胞系的建立及鑒定,為主要內容開展研究,并以此為素材,初步分析色素沉積關鍵基因——小眼畸形相關轉錄因子（microphthalmia-associated transcription factor gene,MITF）的表達模式和功能。所建立的永生化黑色素細胞系為研究兔皮毛黑色素沉積規(guī)律提供一個理想的體外細胞模型,同時為進一步揭示皮毛動物的色素沉積的分子機制奠定了基礎。本實驗結果如下:1、根據(jù)課題組前期建立家兔黑色素細胞體外培養(yǎng)體系,利用兩步酶消化法分離家兔原代皮膚黑色素細胞,并以此為基礎... 

【文章來源】：揚州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－２?ＬＶ－ＳＶ４０ＬＴ慢病毒鑒定結果圖??

經(jīng)０．１％Ｌ－Ｄ〇ｐａ染色后，發(fā)現(xiàn)原代黑色素細胞、第１９代黑色素細胞及第５６代黑色??素細胞，倒置顯微鏡下觀察到細胞的胞漿和樹突均呈現(xiàn)棕褐色，染色結果均為陽性（如??圖２－６），且細胞形態(tài)均呈現(xiàn)多極狀，未發(fā)生明顯變化。??

２３＿??可獲得較純的黑色素細胞，呈多極狀，兩極或三極，折光性強（圖２－３）。??圖２－３原代黑色素細胞形態(tài)（１０〇ｘ）??注：Ａ；分離的第５ｄ黑色素細胞；Ｂ：分離的第９?ｄ黑色素細胞；Ｂ：分離的第ｌｉｄ黑色素細胞；??２．４?ＬＶ－ＳＶ４０ＬＴ慢病毒感染復數(shù)的確定??將病毒液按照ＭＯＩ為５０和１００的比例稀釋感染家兔黑色素細胞，以ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－??Ｐｕｒｏ－ＧＦＰ感染組作為對照。ＭＯＩ為１００的感染效率最高（如圖２－４），因此選擇感染復數(shù)??為１００的病毒稀釋比例感染黑色素細胞。??圖?２－４ｐＬＶＸ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏ－ＧＦＰ?感染?４８ｈ?熒光圖（１００ｘ）??注：Ａ：?ＭＯＩ＝１００；?Ｂ：ＭＯＩ＝５０??２．５家兔黑色素細胞的感染及單克隆細胞株的獲得??按ＭＯＩ為１００的稀釋比例感染黑色素細胞，４８ｈ后換成含有１％ＨＭＧＳ的Ｍ２５４培養(yǎng)??基，添加２?ｐｇ／ｍＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ持續(xù)培養(yǎng)１周，之后換成含有１?ｐｇ／ｍＬ的ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ培養(yǎng)??２周。正常培養(yǎng)的原代黑色素細胞全部死亡，病毒感染組的細胞剩零星幾個細胞。初步觀??察，剩余篩選后陽性表達的細胞仍能保持家兔黑色素細胞的形態(tài)特征，將這些細胞消化下??來后接種到９６孔板中待長滿后擴大培養(yǎng)。得到４株陽性黑色素細胞系，但只有１株傳到??５０代（如圖２－５）。??

【參考文獻】：
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本文編號：3325205