發(fā)布時間：2021-08-04 06:38

　　黏膜免疫在維持機(jī)體局部免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,其中免疫球蛋白A（Immunoglobulin A,IgA）是黏膜免疫應(yīng)答的主效應(yīng)分子。本文擬通過分子生物學(xué)、免疫組織化學(xué)、統(tǒng)計學(xué)等方法制備高效特異的抗雙峰駝IgA抗體,旨在為深入探討雙峰駝IgA在機(jī)體中的相關(guān)免疫學(xué)功能提供依據(jù)與材料支持,進(jìn)而為揭示雙峰駝黏膜免疫機(jī)制奠定基礎(chǔ)。本文首先對雙峰駝IgA的生物信息進(jìn)行了分析。通過DNAMAN、BepiPred 2.0等軟件對雙峰駝IgA重鏈恒定區(qū)（IgA-H）進(jìn)行一級結(jié)構(gòu)的差異性分析、B細(xì)胞抗原表位預(yù)測,結(jié)合篩選出一段具有代表性的基因序列（F-IgA-H）,并使用ProtParam對IgA-H和F-IgA-H的理化性質(zhì)進(jìn)行分析。之后分別構(gòu)建了二者的原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-IgA-H和pET-28a-F-IgA-H,誘導(dǎo)其在BL21中表達(dá),并優(yōu)化培養(yǎng)條件,SDS-PAGE和Western Blot驗(yàn)證其表達(dá)結(jié)果。之后再用純化的重組蛋白分別制備兔抗雙峰駝IgA-H多克隆抗體（PAb-H）與兔抗雙峰駝F-IgA-H多克隆抗體（PAb-F）,ELISA和Western Blot檢測抗體效價和特異性。... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞抗原分析結(jié)果

圖 2 IgA-H、F-IgA-H 一級結(jié)構(gòu)對比結(jié)果Fig.2 The comparison results of primary structure of IgA-H and F-IgA-H3 討論在經(jīng)過軟件對比篩選后的 F-IgA-H 相似性明顯低于 IgA-H，與 IgM-H 的相似性從 34.74%降低為 16.03%，與 IgE-H 的相似性從 33.56%降低為 14.56%；相較結(jié)構(gòu)和功能最為相似的 IgG 而言，篩選后的 F-IgA-H 與 IgG-H 的相似性從 43.0%降低為 21.04%，有助于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展。生物信息學(xué)的作為整個生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的重要組成部分及研究前沿，其主體和靈魂是生物學(xué)，帶著生物學(xué)問題出發(fā)，以各種手段和技術(shù)來解決生物學(xué)問題才是生物信息學(xué)的本質(zhì)[97, 98]。生物信息學(xué)技術(shù)自誕生后，通過構(gòu)建多種共享數(shù)據(jù)平臺，革新檢測技術(shù)，使這門學(xué)科得以飛速發(fā)展。將海量的生物學(xué)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化為可供參考的信息，是生物信息學(xué)的發(fā)展必然結(jié)果，結(jié)合數(shù)據(jù)挖掘，從中尋找規(guī)律，

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019 屆碩士學(xué)位論文濃縮：透析后的蛋白溶液，用紫外分光光度計測得蛋白含量較低，進(jìn)一步濃縮。濃縮時將透析袋埋入蔗糖，至所需體積時取出，用紫外分光光度計測得蛋白濃度為 2.9 mg/mL，每管 500 L 分裝，-80℃保存。2 結(jié)果2.1 雙酶切結(jié)果重組質(zhì)粒 pET-28a-IgA-H 經(jīng)雙酶切鑒定分析后，得到大小約為 1000 bp 的目的片段 IgA-H，結(jié)果如圖 1A 所示。重組質(zhì)粒 pET-28a-F-IgA-H 經(jīng)雙酶切后，得到 500 bp 左右的 F-IgA-H，大小與預(yù)期相符，如圖 1B。兩者皆測序正確，都可進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。


本文編號：3321207