PRRSV GP5與Fc融合蛋白的表達(dá)及其免疫原性研究
發(fā)布時(shí)間：2021-08-04 02:59
豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）由單股正鏈RNA病毒（PRRSV）引起，由于該病毒廣泛的傳播和高致病性，給養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，針對(duì)PRRSV的疫苗并不能提供長(zhǎng)期有效地防護(hù)。GP5是PRRSV主要的糖基化囊膜蛋白，在PRRSV的組裝、入侵以及免疫應(yīng)答過(guò)程中具有重要作用。該蛋白能誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生，是PRRS新型疫苗設(shè)計(jì)的良好靶標(biāo)。先前的研究表明，天然的GP5糖蛋白免疫原性較低，不能使機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫保護(hù)力。GP5蛋白表面的糖基化位點(diǎn)對(duì)中和表位具有覆蓋作用，而且中和表位附近的非中和性表位具有免疫優(yōu)勢(shì)，影響了中和性抗體的產(chǎn)生。在以GP5蛋白為免疫原的亞單位疫苗的制作中，GP5蛋白的信號(hào)肽序列和3個(gè)跨膜區(qū)會(huì)影響該蛋白的表達(dá)量。因此，針對(duì)GP5蛋白的疫苗設(shè)計(jì)，需要對(duì)GP5蛋白進(jìn)行優(yōu)化改造，提高其免疫原性，增強(qiáng)中和抗體產(chǎn)生的能力。我們以高致病性PRRSV毒株為模板優(yōu)化GP5蛋白，首先去除了GP5蛋白的信號(hào)肽和跨膜區(qū)，將胞外域和胞內(nèi)域通過(guò)（GGGGS）3接頭連接，再與Fc片段組成融合蛋白GP5-Fc。由于GP5的中和性表位位于胞外域上，我們還構(gòu)建了胞外域直接與Fc融合的蛋白GP5N-...
【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
PRRSV粒子的結(jié)構(gòu)
PRRSV 粒子的低溫電子斷層成像（Don tomography of the individual PRRSV vir學(xué)研究概況 15kb，包含至少 9 個(gè)開(kāi)放閱讀框（（SHFV）以及乳酸脫氫酶增高癥病相似（den Boon et al. 1991; Conzelm7; Snijder and Meulenberg 1998; Gorb因組結(jié)構(gòu)從 5′端開(kāi)始依次為：5′末ORF1b）、結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)（ORF尾巴（polyA）。該基因組比較復(fù)雜之間還有部分重疊現(xiàn)象。白大的編碼框，長(zhǎng)約 12kb，由 ORF
過(guò)程和蛋白結(jié)構(gòu)上非常相似（den Boon et al. 1991; Conzelmann et al. 1993; Meulenbergal. 1993; Cavanagh 1997; Snijder and Meulenberg 1998; Gorbalenya et al. 2006）。PRRSV基因組是多順?lè)醋樱蚪M結(jié)構(gòu)從 5′端開(kāi)始依次為：5′末端非編碼區(qū)(5′-UTR)、非結(jié)蛋白編碼區(qū)（ORF1a、ORF1b）、結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)（ORF2-ORF7）、3′末端非編碼區(qū)′-UTR) 以及多聚腺苷酸尾巴（polyA）。該基因組比較復(fù)雜，每個(gè)閱讀框連接地相當(dāng)湊，而且相鄰的閱讀框之間還有部分重疊現(xiàn)象。.1 PRRSV 的非結(jié)構(gòu)蛋白ORF1 是 PRRSV 中最大的編碼框，長(zhǎng)約 12kb，由 ORF1a 和 ORF1b 構(gòu)成，約占病基因組的 75%，其結(jié)構(gòu)模式圖如下（圖 1-3）。ORF1a 和 ORF1b 分別編碼多聚蛋白 pp1a pp1ab，這兩個(gè)多聚蛋白在翻譯的過(guò)程中又被水解成 14 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（nsps），其中1a 產(chǎn)生 10 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（nsp1a、nsp1b、nsp2-8），pp1ab 產(chǎn)生 4 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白nsp9-nsp12），這 14 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白中含有蛋白酶（nsp1a、nsp1b、nsp2 和 nsp4），RNA合酶（nsp9），RNA 解旋酶（nsp10）和核酸內(nèi)切酶（nsp11）（den Boon et al. 1995; vanebuhr et al. 2000; Aken et al. 2006）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PRRSV GP5基因的原核表達(dá)及其免疫性分析[J]. 扈鴻霞,方維煥,劉建華,冉多良. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(05)
[2]從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J]. 郭寶清,陳章水,劉文興,崔益洙. 中國(guó)畜禽傳染病. 1996(02)
碩士論文
[1]重慶市部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因的遺傳變異分析[D]. 陳靜.西南大學(xué) 2009
本文編號(hào)：3320865
【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：50 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
PRRSV粒子的結(jié)構(gòu)
PRRSV 粒子的低溫電子斷層成像（Don tomography of the individual PRRSV vir學(xué)研究概況 15kb，包含至少 9 個(gè)開(kāi)放閱讀框（（SHFV）以及乳酸脫氫酶增高癥病相似（den Boon et al. 1991; Conzelm7; Snijder and Meulenberg 1998; Gorb因組結(jié)構(gòu)從 5′端開(kāi)始依次為：5′末ORF1b）、結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)（ORF尾巴（polyA）。該基因組比較復(fù)雜之間還有部分重疊現(xiàn)象。白大的編碼框，長(zhǎng)約 12kb，由 ORF
過(guò)程和蛋白結(jié)構(gòu)上非常相似（den Boon et al. 1991; Conzelmann et al. 1993; Meulenbergal. 1993; Cavanagh 1997; Snijder and Meulenberg 1998; Gorbalenya et al. 2006）。PRRSV基因組是多順?lè)醋樱蚪M結(jié)構(gòu)從 5′端開(kāi)始依次為：5′末端非編碼區(qū)(5′-UTR)、非結(jié)蛋白編碼區(qū)（ORF1a、ORF1b）、結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)（ORF2-ORF7）、3′末端非編碼區(qū)′-UTR) 以及多聚腺苷酸尾巴（polyA）。該基因組比較復(fù)雜，每個(gè)閱讀框連接地相當(dāng)湊，而且相鄰的閱讀框之間還有部分重疊現(xiàn)象。.1 PRRSV 的非結(jié)構(gòu)蛋白ORF1 是 PRRSV 中最大的編碼框，長(zhǎng)約 12kb，由 ORF1a 和 ORF1b 構(gòu)成，約占病基因組的 75%，其結(jié)構(gòu)模式圖如下（圖 1-3）。ORF1a 和 ORF1b 分別編碼多聚蛋白 pp1a pp1ab，這兩個(gè)多聚蛋白在翻譯的過(guò)程中又被水解成 14 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（nsps），其中1a 產(chǎn)生 10 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（nsp1a、nsp1b、nsp2-8），pp1ab 產(chǎn)生 4 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白nsp9-nsp12），這 14 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白中含有蛋白酶（nsp1a、nsp1b、nsp2 和 nsp4），RNA合酶（nsp9），RNA 解旋酶（nsp10）和核酸內(nèi)切酶（nsp11）（den Boon et al. 1995; vanebuhr et al. 2000; Aken et al. 2006）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]PRRSV GP5基因的原核表達(dá)及其免疫性分析[J]. 扈鴻霞,方維煥,劉建華,冉多良. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(05)
[2]從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J]. 郭寶清,陳章水,劉文興,崔益洙. 中國(guó)畜禽傳染病. 1996(02)
碩士論文
[1]重慶市部分地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒GP5基因的遺傳變異分析[D]. 陳靜.西南大學(xué) 2009
本文編號(hào)：3320865
本文鏈接：http://sikaile.net/yixuelunwen/dongwuyixue/3320865.html
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