試驗旨在探究ClpS基因在布魯氏菌中的作用,分析比較ClpS基因突變對布魯氏菌毒力的影響。利用同源重組技術,構建布魯氏菌ClpS基因突變株,通過檢測細菌生長曲線、細菌LPS合成能力及其在巨噬細胞內(nèi)的存活能力和小鼠模型中的毒力,比較親本株2308和突變株ΔClpS兩者之間的差異。結(jié)果顯示,在相同的培養(yǎng)條件下,親本株2308和突變株ΔClpS的細菌濃度無明顯差異,且兩者提取的LPS銀染結(jié)果基本一致,表明ClpS基因突變不影響布魯氏菌生長速度,不影響細菌LPS合成;在細胞感染模型中,突變株ΔClpS在感染后72 h的胞內(nèi)存活能力極顯著低于親本株2308（P<0.01）;小鼠感染試驗顯示,在感染后1周,親本株2308感染組和突變株ΔClpS感染組小鼠脾臟重量及細菌含量無顯著差異,但在感染后4周,突變株ΔClpS感染組的小鼠脾臟細菌含量為10^3.93 CFU/g脾臟,顯著低于親本株2308(10^6.68 CFU/g脾臟,P<0.01),且突變株ΔClpS感染組的小鼠脾臟腫脹程度極顯著低于親本株2308（P<0.01）。綜上所述,布魯氏... 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(11)北大核心

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【部分圖文】：

ClpS基因突變株的構建及鑒定

由圖2可知,在正常TSB培養(yǎng)環(huán)境下,突變株ΔClpS的細菌濃度略低于親本株2308,但差異不顯著(P>0.05)。結(jié)果表明ClpS基因不參與調(diào)控細菌生長周期,ClpS基因突變不影響細菌生長速度。2.3 細菌LPS銀染檢測

為研究ClpS基因突變是否與牛種布魯氏菌的LPS合成相關,提取2株細菌的LPS,經(jīng)12.5% SDS-PAGE電泳和銀染顯色。由圖3可知,突變株ΔClpS與親本株2308一致,仍然保留有光滑型細菌特有的O抗原,而粗糙型細菌則表現(xiàn)為O抗原缺失。因此,ClpS蛋白突變不影響布魯氏菌LPS的合成。2.4 細胞感染試驗


本文編號：3318578