根據(jù)GenBank已登錄的PPRV基因組序列,設(shè)計并合成2對特異性引物,以PPRV疫苗株基因組為模板,經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增獲得N和M基因并進(jìn)行序列分析,再將2個基因插入到原核表達(dá)載體pET-28a中,經(jīng)鑒定正確后轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot檢測。成功克隆PPRV疫苗株N和M基因,重組菌經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)分子質(zhì)量為57.7ku N蛋白（核衣殼蛋白）和38.1ku的M蛋白（基質(zhì)蛋白）,2個蛋白均能與小反芻獸疫陽性血清特異性結(jié)合,具有良好的反應(yīng)原性。 

【文章來源】：西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2017,26(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖１Ｎ和Ｍ基因的擴(kuò)增Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１．Ｎ基因擴(kuò)增產(chǎn)物Ａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｏｆＮｇｅｎｅ；２．Ｍ基因擴(kuò)增產(chǎn)物ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｇｅｎｅ

１５ｍｉｎ。ＥＣＬ反應(yīng)液孵育ＰＶＤＦ膜，暗室壓片曝光。同時設(shè)立陰性對照。２結(jié)果與分析２．１ＰＣＲ擴(kuò)增結(jié)果以ＰＰＲＶ疫苗株（Ｎｉｇｅｒｉａ７５／１株）提取的ＲＮＡ為模板，經(jīng)ＲＴ－ＰＣＲ擴(kuò)增得到１５７８ｂｐ的Ｎ基因和１００８ｂｐ的Ｍ基因，與預(yù)期大小相符（圖１）。Ｍ．ＤＮＡＭａｒｋｅｒＤＬ２０００；１．Ｎ基因擴(kuò)增產(chǎn)物Ａｍｐｌｉｆｉｃａ－ｔｉｏｎｏｆＮｇｅｎｅ；２．Ｍ基因擴(kuò)增產(chǎn)物ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｇｅｎｅ圖１Ｎ和Ｍ基因的擴(kuò)增Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＮａｎｄＭｇｅｎｅｂｙＰＣＲ２．２原核重組質(zhì)粒的鑒定重組質(zhì)粒ｐＥＴ２８ａ－Ｎ經(jīng)ＥｃｏＲⅠ和ＸｈｏⅠ雙酶切鑒定，瓊脂糖凝膠電泳后出現(xiàn)１５７８ｂｐ的目的條帶和５３６９ｂｐ的載體條帶。重組質(zhì)粒ｐＥＴ２８ａ－Ｍ經(jīng)ＢａｍＨⅠ和ＸｈｏⅠ雙酶切鑒定，瓊脂糖凝膠電泳后出現(xiàn)１００８ｂｐ的目的條帶和５３６９ｂｐ的載體條帶。同時雙酶切ｐＥＴ－２８ａ載體·１８０·西北農(nóng)業(yè)學(xué)報２６卷

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]小反芻獸疫病毒Nigeria75/1株M蛋白的原核表達(dá)及單克隆抗體的制備和初步應(yīng)用[D]. 黃華欣.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013



本文編號：3310949