試驗(yàn)一,通過活化酯法將小分子的恩諾沙星（EFLX）偶聯(lián)到牛血清白蛋白（BSA）和雞卵清白蛋白（OVA）上,形成偶聯(lián)物EFLX-BSA和EFLX-OVA,以EFLX-BSA為免疫原試驗(yàn)小鼠,以EFLX-OVA為檢測(cè)原通過ELISA方法檢測(cè)小鼠的血清效價(jià),以及Ci-ELISA檢測(cè)抗體的特異性和最低檢測(cè)限。結(jié)果表明,免疫原和檢測(cè)原均成功合成,血清效價(jià)檢測(cè)結(jié)果是,第一組為25600,第二組和第三組均大于51200,第二組最高;間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法結(jié)果表明,所獲多克隆抗體對(duì)EFLX特異性強(qiáng),最低檢出限為 1.17 ng/mL,IC50值為 54.60 ng/mL,檢測(cè)范圍為 7.39 ng/mL～403.43 ng/mL。試驗(yàn)二,制備抗恩諾沙星的單克隆抗體并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定。采用活化酯法合成恩諾沙星-牛血清白蛋白作為免疫原免疫小鼠,利用雜交瘤細(xì)胞技術(shù)建立雜交瘤細(xì)胞株,利用體內(nèi)誘生法制備單克隆抗體,然后對(duì)制備的單抗的效價(jià)、敏感性、特異性、親和力和亞型等免疫學(xué)特性進(jìn)行鑒定。獲得細(xì)胞株7C5,對(duì)單抗亞型鑒定結(jié)果均為IgG1,誘生腹水中抗體的效價(jià)在1.035×10-6以上,最低檢出限為0.56 n... 

【文章來源】：江西農(nóng)業(yè)大學(xué)江西省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１氟喹諾酮類藥物結(jié)構(gòu)通式??Ｆｉｇ．?１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ??

以及ＬＣ基因片段。設(shè)計(jì)引物時(shí)，兩種抗體庫的??上游引物相同，均根據(jù)抗體骨架區(qū)ＦＲ１或者引導(dǎo)序列的保守區(qū)５’端序列設(shè)計(jì)；下游??引物不同，ＳｃＦｖ庫從鉸鏈區(qū)（Ｊ區(qū)）的保守序列設(shè)計(jì)１５８＊６１１，Ｆａｂ抗體庫從恒定序列中??設(shè)計(jì)�？贵w的可變區(qū)序列中，５’端開始為前導(dǎo)序列，ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３和ＦＲ４為保守??序列，ＣＤＲ１、ＣＤＲ２和ＣＤＲ３為高變區(qū)（圖１）。??ＦＲ１?Ｃ．ＤＲ１?ＦＲ２?ＣＤＲ２?ＦＲ３?ＣＤＲ３?ＦＲ４??愁簽爵細(xì)?Ｌ?．二－ｄ????????圖２抗體可變區(qū)基因示意圖??Ｆｉｇ．２?ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ａｎｔｉｂｏｄｙ?ｇｅｎｅ?ｖａｒｉａｂｌｅ?ｒｅｇｉｏｎ??２．３抗體的篩選??所謂噬菌體抗體庫的篩選，簡(jiǎn)而言之，就是通過一定的免疫學(xué)方法，通過數(shù)次的??“吸附一洗脫一擴(kuò)增”，最終使表達(dá)了目的基因片段的特異性克隆蛋白得以富集１６２，６３］。??根據(jù)能否獲得純化的抗原，抗體的篩選的方法主要分為兩個(gè)方面（圖２）。??２．３．１純化抗原的篩選??固相化抗原篩選法是用純化后的抗原包被在固相介質(zhì)上，比如酶標(biāo)板、免疫試管、??親和柱等上，表達(dá)了特異性抗體的噬菌體能針對(duì)抗原表位特異性結(jié)合，從而被篩選出??來。此種方法也是目前采用最多的方法之一｜６４］�？乖合嗪Y選法是將抗原標(biāo)記生物素??后，利用鏈親和素磁珠借助磁場(chǎng)作用力進(jìn)行噬菌體篩選的一種方法，Ｌａｂｒｉｇｎ等１６５１用??此方法對(duì)膜蛋白噬菌體庫成功進(jìn)行了篩眩??２．３．２非純化抗原的篩選??２．３．２．１細(xì)胞篩選法??某些抗原存在難以純化或抗原＋可知性問題，細(xì)胞篩選解決了這些難題。比如??Ｓｈａｄｉｄｉ等Ｉ６６１用白血病細(xì)

ｍｌ?ＰＢＳ??（ｐＨ?７．４），另稱�。保福恚�?ＯＶＡ溶于３ｍＬ?ＰＢＳ?（ｐＨ?７．４），得此溶液為Ｂ液。將上述反??應(yīng)液Ａ?（過夜處理）逐滴加入Ｂ中，要求每１０？１５?ｍｉｎ加入２００（ｉＬ，１．５ｈ內(nèi)操作完??畢。合成后完全抗原置入透析袋中，在盛有ＰＢＳ液的燒杯中磁力攪拌器條件下透析??７２?ｈ，每１２?ｈ換液一次。收集合成的抗原，如有沉淀離心機(jī)１０００?ｒｐｍ?xiàng)l件下離心５?ｍｉｎ??后取上清，用此法對(duì)偶聯(lián)抗原進(jìn)行初步純化。偶聯(lián)抗原合成原理見圖５。??〇??。力８?Ａ??圖４恩諾沙星結(jié)構(gòu)式??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ??１２??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]奶牛孕酮半定量檢測(cè)膠體金試紙條的研制[D]. 李志源.天津農(nóng)學(xué)院 2012
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[4]氯霉素膠體金試紙條的研制[D]. 陳發(fā)榮.南昌大學(xué) 2011
[5]萊克多巴胺膠體金試紙條的研制及生產(chǎn)線設(shè)計(jì)[D]. 高鵬.南昌大學(xué) 2011
[6]恩諾沙星時(shí)間分辨熒光免疫和納米均相熒光免疫技術(shù)的建立與考核[D]. 趙莉莉.江南大學(xué) 2011
[7]抗氯霉素單克隆抗體的制備及化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法的建立[D]. 鐘寒燕.南昌大學(xué) 2010
[8]達(dá)氟沙星、加替沙星、特布他林殘留的酶聯(lián)免疫測(cè)定法的建立[D]. 劉中秋.山東大學(xué) 2009
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[10]促黃體素單克隆抗體的制備與鑒定[D]. 崔貞亮.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3303902