本論文研究在二、三維培養(yǎng)模式下,添加不同濃度比例的短鏈脂肪酸（乙酸、β-羥丁酸）、長鏈脂肪酸（油酸、亞油酸、亞麻酸）和激素（催乳素、生長激素、胰島素）對奶牛乳腺上皮細(xì)胞（BMECs）乳蛋白和乳脂肪合成的影響,旨在為調(diào)控乳成分合成提供理論依據(jù)。本論文包括兩部分研究內(nèi)容,第一部分內(nèi)容在二維培養(yǎng)模式下,研究組合添加短鏈（SCFA）和長鏈脂肪酸（LCFA）對BMECs相對增殖率（RGR）、甘油三酯（TAG）的合成量以及乳蛋白和乳脂合成相關(guān)基因的表達(dá)量的影響。試驗(yàn)分為5組,對照組不添加脂肪酸,試驗(yàn)Ⅰ組和Ⅱ組添加的乙酸、β-羥丁酸濃度比例均為2.0∶1.0,油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例分別為2.0∶13.3∶1.0和9.6∶7.4∶1.0;試驗(yàn)Ⅲ組和Ⅳ組添加的乙酸、β-羥丁酸的濃度比例均為1.0∶1.0,油酸、亞油酸、亞麻酸的濃度比例分別為2.0∶13.3∶1.0和9.6∶7.4∶1.0。各組添加的短鏈脂肪酸（SCFA）和長鏈脂肪酸（LCFA）總濃度為14.541 mmol/L。篩選出的適宜的脂肪酸濃度,在三維培養(yǎng)條件下開展組合添加試驗(yàn),試驗(yàn)包括三組,對照組和試驗(yàn)I組和II組。第二部分內(nèi)容研究二... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

mTOR調(diào)控蛋白質(zhì)翻譯途徑Fig.1proteintranslationpathwayregulatedbymTOR

圖 2 乳脂肪合成相關(guān)基因網(wǎng)絡(luò)（引自 Bionaz M 等[72]）Fig.2 Networks among genes involved in milk fat synthesis1.5 本研究的目的意義乳蛋白和乳脂肪是構(gòu)成牛奶營養(yǎng)品質(zhì)的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，促進(jìn)乳腺內(nèi)乳蛋白和乳脂

眼科剪剪掉導(dǎo)管、脂肪組織和結(jié)締組織，后將其剪成 1 mm3 的小塊，用彎頭吸管吸取 1mL 的組織移入 10 mL 的離心管中，加入 2～3mL II 型膠原酶放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約 1 h 10 min，期間每 15～20 min 振蕩一次，消化完全后，用 80 目無菌的網(wǎng)紗充分過濾，接下來對濾液進(jìn)行離心（1200r/min）， 8min 后，將沉淀加入到配置好的需要濃度體積的生長培養(yǎng)基（生長培養(yǎng)基為添加 10% 胎牛血清、5 μg/mL 胰島素轉(zhuǎn)鐵蛋白溶液、1 ng/mL 氫化可得松 2 mM 谷氨酰胺及的 DMEM/F12 培養(yǎng)基）中，然后搖勻裝入到培養(yǎng)瓶，在 37℃、5%CO2濃度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞長滿培養(yǎng)瓶底部的 80%左右時(shí)，利用胰酶對成纖維上皮細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞的消化時(shí)間不同來純化BMECs 并傳代。2.1.1.3.2 BMECs 的鑒定本試驗(yàn)通過熒光免疫染色法鑒定 BMECs 骨架蛋白 CK-18 的表達(dá)情況，經(jīng)檢測所培養(yǎng)的 BMECs 呈陽性（圖 5），說明本試驗(yàn)分離培養(yǎng)的細(xì)胞是 BMECs。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]二、三維培養(yǎng)模式下添加激素對奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂肪和乳蛋白合成的影響[D]. 邢媛媛.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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本文編號：3302901