哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜的過程,主要包括卵母細(xì)胞的生長和減數(shù)分裂、顆粒細(xì)胞增殖、分化,涉及卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞間的協(xié)同發(fā)育和調(diào)控等。蛋白激酶C（PKC）超家族包括多種成員,主要分為三類,經(jīng)典型PKC、新型PKC和非典型PKC。PKC超家族成員在多種細(xì)胞類型的增殖和分化等過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。PKC信號(hào)通路在哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞減數(shù)分裂恢復(fù)過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用,卵丘細(xì)胞中PKC的活化可以促進(jìn)卵母細(xì)胞恢復(fù)減數(shù)分裂,而卵母細(xì)胞中的PKC則抑制卵母細(xì)胞成熟,但是PKC在卵泡發(fā)育過程中的作用尚不明了。本課題利用小鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)模型和PKC廣譜抑制劑staurosporine（星形孢菌素）,研究在腔前卵泡體外培養(yǎng)過程中的不同階段抑制PKC后其對(duì)卵泡發(fā)育、顆粒細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的影響,并通過檢測抑制PKC后對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞縫隙連接蛋白connexin（Cx）43的定位和表達(dá)、Smad家族成員Smad4的表達(dá)等,嘗試揭示PKC參與卵泡發(fā)育和顆粒細(xì)胞功能的調(diào)控機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：1.抑制PKC嚴(yán)重影響小鼠腔前卵泡的體外發(fā)育進(jìn)程。我們從出生后12天雌性昆明小鼠卵巢內(nèi)剝離出腔前卵泡進(jìn)行體外培養(yǎng)... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
目錄
摘要
ABSTRACT
縮略語表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 PKC信號(hào)通路在細(xì)胞中作用的研究進(jìn)展
        1.1.1 PKC信號(hào)通路與細(xì)胞增殖
        1.1.2 PKC信號(hào)通路與細(xì)胞凋亡
        1.1.3 PKC信號(hào)通路與細(xì)胞縫隙連接
        1.1.4 PKC信號(hào)通路與TGF-β/Smad家族
    1.2 哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育機(jī)制的研究進(jìn)展
        1.2.1 激素類
        1.2.2 TGF-β超家族
        1.2.3 細(xì)胞縫隙連接
        1.2.4 絲裂原活化蛋白激酶
    1.3 蛋白激酶C與哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育的相互影響
        1.3.1 蛋白激酶C與顆粒細(xì)胞增殖
        1.3.2 蛋白激酶C與卵母細(xì)胞恢復(fù)減數(shù)分裂
2 研究目的及意義
3 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 主要試劑與抗體
        3.1.2 主要儀器設(shè)備
        3.1.3 主要溶液及相關(guān)緩沖液
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 腔前卵泡的剝離與培養(yǎng)
        3.2.2 顆粒細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.3 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡
        3.2.4 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)(顆粒細(xì)胞)
        3.2.5 免疫熒光細(xì)胞化學(xué)(腔前卵泡)
        3.2.6 共聚焦顯微鏡采集圖像
        3.2.7 蛋白提取
        3.2.8 蛋白濃度檢測
        3.2.9 免疫印記
        3.2.10 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QPCR)
            3.2.10.1 試劑
            3.2.10.2 儀器
            3.2.10.3 具體步驟
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 Staurosporine影響腔前卵泡體外發(fā)育
        4.1.1 Staurosporine抑制腔前卵泡體外發(fā)育
        4.1.2 Staurosporine抑制成熟卵泡體外誘導(dǎo)排卵
    4.2 PKC抑制劑staurosporine誘導(dǎo)體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞凋亡
        4.2.1 不同濃度的staurosporine影響體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)
        4.2.2 staurosporine以濃度依賴方式誘導(dǎo)體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡
        4.2.3 staurosporine誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因表達(dá)
        4.2.4 其它種類PKC抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞凋亡及壞死的影響
    4.3 Staurosporine對(duì)腔前卵泡和顆粒細(xì)胞中縫隙連接蛋白connexin43表達(dá)和定位的影響
        4.3.1 Staurosporine影響腔前卵泡中縫隙連接蛋白connexin43的定位
        4.3.2 Staurosporine影響顆粒細(xì)胞中縫隙連接蛋白connexin43的定位
    4.4 Staurosporine對(duì)體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞smad4蛋白表達(dá)的影響
        4.4.1 Staurosporine影響腔前卵泡smad4蛋白表達(dá)
        4.4.2 Staurosporine對(duì)體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞smad4蛋白表達(dá)的影響
5 討論
    5.1 阻斷PKC信號(hào)通路可抑制腔前卵泡體外發(fā)育
    5.2 阻斷PKC信號(hào)通路促進(jìn)體外培養(yǎng)顆粒細(xì)胞發(fā)生凋亡
    5.3 PKC抑制劑staurosporine影響細(xì)胞縫隙連接蛋白connexin43及其磷酸化
    5.4 PKC抑制劑staurosporine影響Smad4蛋白
    5.5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3301442