發(fā)布時(shí)間：2021-07-24 10:48

　　馬業(yè)由古老的產(chǎn)業(yè)向現(xiàn)代馬術(shù)和賽馬產(chǎn)業(yè)發(fā)展,已經(jīng)成為當(dāng)今重要的經(jīng)濟(jì)支柱,我國(guó)是養(yǎng)馬大國(guó),以蒙古馬居多。蒙古馬具有抗寒、抗病、耐粗飼的特點(diǎn),在馬的遺傳資源中是一個(gè)及其珍貴的基因庫。但是蒙古馬的育種繁殖方面研究相對(duì)薄弱,從而影響了馬匹改良進(jìn)程。精原干細(xì)胞是雄性動(dòng)物體內(nèi)唯一能夠進(jìn)行有絲分裂,并且能把遺傳信息傳遞給下一代的干細(xì)胞,然而在眾多睪丸細(xì)胞中精原干細(xì)胞數(shù)量較少,為其后續(xù)分離純化帶來難度。迄今為止,模型動(dòng)物精原干細(xì)胞的純化培養(yǎng)體系日漸成熟,然而對(duì)于馬屬動(dòng)物的精原干細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)卻仍然處于初級(jí)階段。因此,本研究通過建立蒙古馬睪丸精原干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)體系,有利于對(duì)精原干細(xì)胞的長(zhǎng)期培養(yǎng)和生長(zhǎng)條件的進(jìn)一步探索,不僅可以揭示蒙古馬睪丸精原干細(xì)胞的體外增殖特點(diǎn),還可以進(jìn)一步探究蒙古馬睪丸發(fā)育和精子產(chǎn)生機(jī)制,對(duì)蒙古馬的改良以及育種有著重要意義。本實(shí)驗(yàn)以2歲蒙古馬為研究對(duì)象,取其睪丸通過機(jī)械分離法和酶逐步消化法獲得睪丸單細(xì)胞懸液,經(jīng)過差速貼壁法進(jìn)行分離純化精原干細(xì)胞,然后接種于事先復(fù)蘇好的支持細(xì)胞飼養(yǎng)層上,并采用堿性磷酸酶（AKP）染色、免疫熒光染色、qRT-PCR進(jìn)行特異性標(biāo)志基因鑒定。研究結(jié)果如... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２睪丸曲細(xì)精管中精子生成過程??Ｆｉｇ?．２?Ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｉｎ?ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ?ｓｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓ?ｔｕｂｕｌｅｓ??

４?蒙古馬睪丸精原干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)與鑒定???，ｄ＞ｕｍ，ｎａｈ?ｌ??？｛??《辦）?ｍｙｏｉｄ?ｃｅｌｌ?ｂｉｏｏｄ?ｖｅｓｓｅｌ?＾??Ａ?／Ｊ??ｃｓｆ－１?＾?？?〇ｒ?Ｉ??丨?，Ｎ??ｔｏｆ?＿?ＧＤＮＦ?ｌｅｓｔｏｓｉｃｒｏｎｃ?（?？）??＜Ｌ?ｌｅ，ｕ＿?［ｍ??Ｓｅｒｔｏｌｉ?ｃ？Ｉｌ?ＬｅｙｄｉｇｃｅＨ??圖３生精小管微環(huán)境??Ｆｉｇ?．３?Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ?ｏｆ?ｓｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓ?ｔｕｂｕｌｅｓ??１．３?精原干細(xì)胞（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ?ＳＳＣｓ）??１．３．１精原干細(xì)胞簡(jiǎn)介??精原干細(xì)胞（Ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａ?Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌ丨ｓ，ＳＳＣｓ）位于曲精細(xì)管基膜上既能自我更??新維持自身數(shù)量恒定，又能定向分化產(chǎn)生精母細(xì)胞的一類原始精原細(xì)胞。由于雄性動(dòng)??物的生長(zhǎng)發(fā)育，原始生殖細(xì)胞向生殖母細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)變，并分化為精原干細(xì)胞。睪丸中??的精原千細(xì)胞（ＳＳＣｓ）具有獨(dú)特的自我更新和分化的能力，在動(dòng)物遺傳學(xué)、育種學(xué)和繁??

ｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ??ｒｅｎｅｗａｌ＾ｒ＾ｌ＾??ＳＳＣｓ?ＳＳＣｓ??ａ?ＳＳＣｓ?，一??Ｄ?ｉ?ｆ?ｆ?ｅｒｅｎｔ?ｉ?ａｔ?ｉ?ｏｎ?＾?ｂ?ｏｒ?＾?？八５＾．．??撕?Ｊ?ＳＳＣｓ?＾?ＳＳＣｓ?Ａｐｒ??Ａｐｒ?ＳＳＣｓ??Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ??Ｚ皤??ＳＳＣｓ??ＳＳＣｓ?＾??Ｖ?ＳＳＣｓ??ＳＳＣｓ?＇??Ａｐｒ??Ｃｏｃｍｎｉｔｔｅｄ??Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｃｅｌｌ??圖４精原干細(xì)胞分化示意圖??Ｆｉｇ?．４?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａ?Ｉ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ??１．３．４精原干細(xì)胞的特殊生長(zhǎng)環(huán)境??精原千細(xì)胞生長(zhǎng)在一個(gè)特殊的微環(huán)境中，在這種微環(huán)境中其保持著自我更新和分??化并維持睪丸生精。這種微環(huán)境主要由間質(zhì)細(xì)胞、管周肌細(xì)胞和支持細(xì)胞等組成［２６］。??支持細(xì)胞能夠?yàn)榫杉?xì)胞提供其生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng)因子，例如，膠質(zhì)細(xì)胞源神經(jīng)營(yíng)??養(yǎng)因子（ＧＤＮＦ），其主要作用促進(jìn)精原干細(xì)胞增殖發(fā)育并維持自我更新，對(duì)精原干??細(xì)胞體外的培養(yǎng)有著維持原狀保證不分化的作用，管周肌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞能夠分泌集??落刺激因子（ＣＳＦ－１）能夠維持ＧＤＮＦ對(duì)精原干細(xì)胞的作用，間質(zhì)細(xì)胞還可以分泌一??切有助于睪丸生精的激素，促進(jìn)精子形成。??１．３．５精原干細(xì)胞表面分子標(biāo)記物??精原千細(xì)胞在睪丸中的含量極少，相當(dāng)于４０００個(gè)睪丸細(xì)胞中只存在１個(gè)精原干??細(xì)胞，因此在分離培養(yǎng)方面有著巨大困難。若想采用分子標(biāo)記法與流式細(xì)胞分選儀或??者免疫磁珠分選設(shè)備相結(jié)合進(jìn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3300505