馬業(yè)由古老的產(chǎn)業(yè)向現(xiàn)代馬術(shù)和賽馬產(chǎn)業(yè)發(fā)展,已經(jīng)成為當今重要的經(jīng)濟支柱,我國是養(yǎng)馬大國,以蒙古馬居多。蒙古馬具有抗寒、抗病、耐粗飼的特點,在馬的遺傳資源中是一個及其珍貴的基因庫。但是蒙古馬的育種繁殖方面研究相對薄弱,從而影響了馬匹改良進程。精原干細胞是雄性動物體內(nèi)唯一能夠進行有絲分裂,并且能把遺傳信息傳遞給下一代的干細胞,然而在眾多睪丸細胞中精原干細胞數(shù)量較少,為其后續(xù)分離純化帶來難度。迄今為止,模型動物精原干細胞的純化培養(yǎng)體系日漸成熟,然而對于馬屬動物的精原干細胞的體外分離培養(yǎng)卻仍然處于初級階段。因此,本研究通過建立蒙古馬睪丸精原干細胞體外分離培養(yǎng)體系,有利于對精原干細胞的長期培養(yǎng)和生長條件的進一步探索,不僅可以揭示蒙古馬睪丸精原干細胞的體外增殖特點,還可以進一步探究蒙古馬睪丸發(fā)育和精子產(chǎn)生機制,對蒙古馬的改良以及育種有著重要意義。本實驗以2歲蒙古馬為研究對象,取其睪丸通過機械分離法和酶逐步消化法獲得睪丸單細胞懸液,經(jīng)過差速貼壁法進行分離純化精原干細胞,然后接種于事先復(fù)蘇好的支持細胞飼養(yǎng)層上,并采用堿性磷酸酶（AKP）染色、免疫熒光染色、qRT-PCR進行特異性標志基因鑒定。研究結(jié)果如... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２睪丸曲細精管中精子生成過程??Ｆｉｇ?．２?Ｔｈｅ?ｐｒｏｃｅｓｓ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｉｎ?ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ?ｓｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓ?ｔｕｂｕｌｅｓ??

４?蒙古馬睪丸精原干細胞體外分離培養(yǎng)與鑒定???，ｄ＞ｕｍ，ｎａｈ?ｌ??？｛??《辦）?ｍｙｏｉｄ?ｃｅｌｌ?ｂｉｏｏｄ?ｖｅｓｓｅｌ?＾??Ａ?／Ｊ??ｃｓｆ－１?＾?？?〇ｒ?Ｉ??丨?，Ｎ??ｔｏｆ?＿?ＧＤＮＦ?ｌｅｓｔｏｓｉｃｒｏｎｃ?（?？）??＜Ｌ?ｌｅ，ｕ＿?［ｍ??Ｓｅｒｔｏｌｉ?ｃ？Ｉｌ?ＬｅｙｄｉｇｃｅＨ??圖３生精小管微環(huán)境??Ｆｉｇ?．３?Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ?ｏｆ?ｓｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓ?ｔｕｂｕｌｅｓ??１．３?精原干細胞（ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａｌ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ?ＳＳＣｓ）??１．３．１精原干細胞簡介??精原干細胞（Ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａ?Ｓｔｅｍ?Ｃｅｌ丨ｓ，ＳＳＣｓ）位于曲精細管基膜上既能自我更??新維持自身數(shù)量恒定，又能定向分化產(chǎn)生精母細胞的一類原始精原細胞。由于雄性動??物的生長發(fā)育，原始生殖細胞向生殖母細胞進行轉(zhuǎn)變，并分化為精原干細胞。睪丸中??的精原千細胞（ＳＳＣｓ）具有獨特的自我更新和分化的能力，在動物遺傳學(xué)、育種學(xué)和繁??

ｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ??ｒｅｎｅｗａｌ＾ｒ＾ｌ＾??ＳＳＣｓ?ＳＳＣｓ??ａ?ＳＳＣｓ?，一??Ｄ?ｉ?ｆ?ｆ?ｅｒｅｎｔ?ｉ?ａｔ?ｉ?ｏｎ?＾?ｂ?ｏｒ?＾?？八５＾．．??撕?Ｊ?ＳＳＣｓ?＾?ＳＳＣｓ?Ａｐｒ??Ａｐｒ?ＳＳＣｓ??Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃａｌ?ｄｉｖｉｓｉｏｎ??Ｚ皤??ＳＳＣｓ??ＳＳＣｓ?＾??Ｖ?ＳＳＣｓ??ＳＳＣｓ?＇??Ａｐｒ??Ｃｏｃｍｎｉｔｔｅｄ??Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｃｅｌｌ??圖４精原干細胞分化示意圖??Ｆｉｇ?．４?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｐｅｒｍａｔｏｇｏｎｉａ?Ｉ?ｓｔｅｍ?ｃｅｌｌｓ??１．３．４精原干細胞的特殊生長環(huán)境??精原千細胞生長在一個特殊的微環(huán)境中，在這種微環(huán)境中其保持著自我更新和分??化并維持睪丸生精。這種微環(huán)境主要由間質(zhì)細胞、管周肌細胞和支持細胞等組成［２６］。??支持細胞能夠為精原干細胞提供其生長所必須的營養(yǎng)因子，例如，膠質(zhì)細胞源神經(jīng)營??養(yǎng)因子（ＧＤＮＦ），其主要作用促進精原干細胞增殖發(fā)育并維持自我更新，對精原干??細胞體外的培養(yǎng)有著維持原狀保證不分化的作用，管周肌細胞和間質(zhì)細胞能夠分泌集??落刺激因子（ＣＳＦ－１）能夠維持ＧＤＮＦ對精原干細胞的作用，間質(zhì)細胞還可以分泌一??切有助于睪丸生精的激素，促進精子形成。??１．３．５精原干細胞表面分子標記物??精原千細胞在睪丸中的含量極少，相當于４０００個睪丸細胞中只存在１個精原干??細胞，因此在分離培養(yǎng)方面有著巨大困難。若想采用分子標記法與流式細胞分選儀或??者免疫磁珠分選設(shè)備相結(jié)合進

【參考文獻】：
期刊論文
[1]精原干細胞體外培養(yǎng)方法及應(yīng)用研究進展[J]. 李彩虹,李春義,許蓬,龐希寧.  中國性科學(xué). 2020(01)
[2]精原干細胞龕境調(diào)控因子的研究進展[J]. 喬斌,唐志安.  中國性科學(xué). 2020(01)
[3]綿羊睪丸支持細胞的分離鑒定及其在山羊痘病毒疫苗株培養(yǎng)中的應(yīng)用[J]. 杜國玉,吳錦艷,尚振華,李玲霞,曹小安,劉永生,劉湘濤,尚佑軍.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2020(03)
[4]內(nèi)蒙古馬產(chǎn)業(yè)振興發(fā)展戰(zhàn)略研究[J]. 王懷棟.  北方經(jīng)濟. 2019(11)
[5]三個階段牦牛睪丸發(fā)育過程中piRNA的鑒定及分析研究[J]. 殷實,秦文昌,王斌,周婧雯,楊柳青,李鍵.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2019(11)
[6]睪丸發(fā)育與精子發(fā)生相關(guān)miRNAs的研究進展[J]. 白曼,孫麗敏,項露頡,賈超,李佳蓉,姜懷志.  中國畜牧雜志. 2017(06)
[7]內(nèi)蒙古地區(qū)馬業(yè)發(fā)展趨向[J]. 薩如拉,白東義,芒來.  畜牧與飼料科學(xué). 2015(08)
[8]大鼠精原干細胞培養(yǎng)飼養(yǎng)層的制備[J]. 王振,張斌,李明國,康印東,王施廣,張偉君,王養(yǎng)民.  解放軍醫(yī)藥雜志. 2015(07)
[9]蒙古馬種質(zhì)資源保護及其技術(shù)措施芻議[J]. 阿娜爾,楊永平,黃金龍,芒來.  內(nèi)蒙古科技與經(jīng)濟. 2013(04)
[10]小鼠睪丸支持細胞體外分離培養(yǎng)的研究[J]. 洪潔赟,李青旺,江中良,王翠玲,劉玉志,張歡歡.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2012(13)

博士論文
[1]小鼠精原細胞體外長期存活及增殖研究[D]. 李蓮軍.中國人民解放軍軍需大學(xué) 2002

碩士論文
[1]Gata4和Gata6在尼羅羅非魚類固醇生成和配子發(fā)生中作用研究[D]. 何雪.西南大學(xué) 2015
[2]牦牛Sertoli細胞的純化培養(yǎng)與生物學(xué)特性研究[D]. 張華.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3300505