本文根據(jù)GenBank中巴氏桿菌外膜蛋白H（OmpH）基因核苷酸序列（登錄號(hào)：HM582882）分別設(shè)計(jì)了含信號(hào)肽和去信號(hào)肽兩對(duì)特異性引物，通過PCR方法擴(kuò)增青海省牦牛源多殺性巴氏桿菌(（Pasteurella mutocida，Pm）分離株P(guān)0910的OmpH基因，分別得到含信號(hào)肽的OmpH片段（HM）和成熟外膜蛋白H的OmpH基因，再分別克隆到pMD19-T Simple載體上，然后進(jìn)行序列測(cè)定和分析。結(jié)果表明，含信號(hào)肽的基因全長(zhǎng)1005bp，包含一個(gè)完整的開放閱讀框，編碼334個(gè)氨基酸，前20個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列。成熟外膜蛋白含有一個(gè)945bp的開放閱讀框，編碼314個(gè)氨基酸。為了獲得可溶性的蛋白，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了不同表達(dá)載體的選擇。首先將成熟外膜蛋白H基因克隆到pET-32a載體和pCold I載體上，分別轉(zhuǎn)入BL-21，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后得到的重組蛋白幾乎都以包涵體形式存在。然后將OmpH基因克隆到pMAL-c2x表達(dá)載體中，構(gòu)建原核重組表達(dá)質(zhì)粒pMAL-c2x-OmpH，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL-21并進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE結(jié)果表明：重組融合蛋白（MBP-OmpH）大小為76... 

【文章來(lái)源】：青海大學(xué)青海省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增結(jié)果

增出 1000bp 左右的條帶，-1）。M 1 2 3 4圖 2-1 PCR 擴(kuò)增結(jié)果Fig.2-1 PCR amplification r 1、2.PCR 擴(kuò)增 OmpH 基因產(chǎn)Marker 1、2. The amplificatiohe amplification products of HM 1 2bpbpk

圖 2-3 pMD19-T Simple 載體圖譜及多克隆位點(diǎn)Fig.2-3 Vector map and clone sites of pMD19 - T SimpleOmpH

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]牦牛源多殺性巴氏桿菌外膜蛋白OmpH和OmpA重組亞單位疫苗對(duì)小鼠的免疫效果[J]. 田亮,康立超,趙文娟,薄新文,馬勛.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2013(02)
[2]雪山草雞多殺性巴氏桿菌的診斷與治療[J]. 李詠紅.  中國(guó)畜禽種業(yè). 2012(10)
[3]禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白H基因重組質(zhì)粒在雞體內(nèi)免疫效果的研究[J]. 宮強(qiáng),彭永剛,秦翠麗,牛明福,張愛國(guó).  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(10)
[4]竹鼠多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J]. 蔣成硯,謝昆,魏靜萍,田婷,起曉魏.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(29)
[5]梅花鹿巴氏桿菌病的診療[J]. 王瑞玲.  北方牧業(yè). 2012(16)
[6]水貂巴氏桿菌和克雷伯菌混合感染的診治[J]. 任橋,李麗,鄒本革,劉煥奇,張啟迪,畢可東.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2012(16)
[7]禽多殺性巴氏桿菌外膜蛋白單價(jià)DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析[J]. 宮強(qiáng),張愛國(guó),牛明福,秦翠麗,孫曉菲.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(08)
[8]禽多殺性巴氏桿菌C48-3株hexABC基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性分析[J]. 吾魯木汗·那孜爾別克,張宇鳳,龔鳳娟,恩特馬克·布拉提白.  中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(08)
[9]PmC47-8株OmpH蛋白結(jié)構(gòu)的初步預(yù)測(cè)[J]. 繁萍,張瑞強(qiáng),張衛(wèi),豐琳瑯,陳忍霞,趙靜.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(16)
[10]牦牛源多殺性巴氏桿菌外膜蛋白H重組亞單位疫苗對(duì)小鼠的免疫保護(hù)效果[J]. 田亮,康立超,趙文娟,薄新文,馬勛.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2012(03)



本文編號(hào)：3300026