DMRT1（Double sex and Mab-3 related transcription factor 1）是雞性腺分化和發(fā)育的關(guān)鍵候選基因,其詳細(xì)的功能和作用途徑還未被闡明。為了解明DMRT1在雞性腺分化和發(fā)育過程中的功能,研究首次利用在線sg RNA平臺(tái)設(shè)計(jì)4條雞DMRT1 sg RNA序列,構(gòu)建了4個(gè)sg RNA表達(dá)載體:Guide-1、Guide-2、Guide-3和Guide-4。轉(zhuǎn)染雞DF-1成纖維細(xì)胞后,利用T7E1內(nèi)切酶的方法檢測(cè)4個(gè)表達(dá)載體的打靶效率。結(jié)果顯示,成功構(gòu)建了4條正確的雞DMRT1 sg RNA表達(dá)載體,并且都能高效地在DF-1細(xì)胞中表達(dá),其中Guide-4表達(dá)載體能有效地打靶DMRT1基因,打靶效率為24.82%。研究結(jié)果為進(jìn)一步在雞胚敲除DMRT1基因,研究其功能奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國(guó)家禽. 2017,39(02)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒、菌種和細(xì)胞株
        1.1.2 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 sg RNA的設(shè)計(jì)和合成
        1.2.2 sg RNA表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3 高純?nèi)?nèi)毒素質(zhì)粒的提取
        1.2.4 sg RNA表達(dá)載體打靶效率的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 CRISPR/Cas9重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
    2.3 sg RNA打靶效率檢測(cè)
3 討論



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