副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis, Hps）是革拉瑟氏病的致病菌,屬于巴斯德菌科家族成員之一,可引發(fā)豬多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎。常感染早期斷奶仔豬,甚至能從健康豬的上呼吸道分離出。Hps常與其它病原菌發(fā)生并發(fā)或繼發(fā)感染,死亡率高,致使全世界范圍內(nèi)養(yǎng)豬行業(yè)經(jīng)濟損失嚴重�？梢酝ㄟ^抗生素治療和接種疫苗在一定程度上來預(yù)防和控制革拉瑟氏病的發(fā)生。然而,防控本病的關(guān)鍵是先對病原體進行鑒別診斷。找到Hps種屬特異性基因并以此為靶基因進行PCR擴增,是準確、快速診斷Hps的關(guān)鍵。抑制消減雜交（suppression subtractive hybridization.SSH）是一項應(yīng)用于篩選原核生物或真核生物差異基因及差異表達基因的有效途徑,應(yīng)用廣泛,近年來可用于比較兩種親緣性相近的菌株基因組之間的差異。本實驗以副豬嗜血桿菌（Hps）血清5型參考菌株Nagasaki和與之親緣性相近的豬胸膜肺炎放線桿菌（App）血清1型參考菌株Shope4074作為研究對象,通過抑制消減雜交（SSH）技術(shù)篩選Hps相對于App的差異基因。分別提取Hps和App基因組DNA,得到完好的核酸條帶。經(jīng)Alu... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略表
1 引言
    1.1 副豬嗜血桿菌研究現(xiàn)狀
        1.1.1 病原學(xué)
        1.1.2 流行病學(xué)與分型
        1.1.3 致病機理與毒力因子
        1.1.4 病理變化
        1.1.5 診斷
        1.1.6 防治
    1.2 抑制消減雜交
        1.2.1 抑制消減雜交技術(shù)的原理
        1.2.2 抑制消減雜交技術(shù)的特點
        1.2.3 抑制消減雜交技術(shù)的應(yīng)用
    1.3 本試驗研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種及載體
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基配制
        2.1.4 Southern blot溶液配制
        2.1.5 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 細菌純培養(yǎng)及基因組DNA的提取
        2.2.2 抑制消減雜交(SSH)
        2.2.3 差異片斷的克隆
        2.2.4 Southern blot分析
        2.2.5 差異片段序列測定與分析
        2.2.6 副豬嗜血桿菌PCR診斷方法的建立
3 結(jié)果與分析
    3.1 基因組DNA提取
    3.2 酶切
    3.3 Hps基因組DNA接頭連接效率分析
    3.4 抑制消減雜交結(jié)果及效率分析
    3.5 差異片斷克隆的篩選
    3.6 Southern blot分析
    3.7 差異基因同源性分析
    3.8 PCR診斷方法的建立
        3.8.1 PCR特異性分析
        3.8.2 PCR敏感性分析
        3.8.3 臨床樣品的檢測
4 討論
    4.1 基因組DNA質(zhì)量
    4.2 抑制消減雜交技術(shù)在細菌差異基因篩選中的應(yīng)用
    4.3 抑制消減雜交技術(shù)的影響因素
    4.4 Southern blot分析
    4.5 PCR診斷方法的建立
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究[D]. 蔡旭旺.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3293246