自2017年以來,華東三�。ㄉ綎|、安徽和江蘇）陸續(xù)出現(xiàn)了一種以櫻桃谷鴨為感染對(duì)象的,全身羽毛部分或全部脫落,屠宰后羽根難以拔除（毛刺鴨）的臨床疾病,暫稱為“脫羽綜合征”（Feathers Shedding Syndrome,FSS）。該病在2019年臨床危害尤為嚴(yán)重,發(fā)病鴨以櫻桃谷肉鴨為主,發(fā)病鴨場(chǎng)該病的發(fā)病率為3%-70%。發(fā)病鴨主要表現(xiàn)為生長(zhǎng)遲緩,采食率下將,羽毛脫落越來越嚴(yán)重;部分鴨群會(huì)出現(xiàn)死亡,死亡率不等,給肉鴨養(yǎng)殖戶造成巨大損失。因鴨圓環(huán)病毒（Duck circovirus,DuCV）和新型鵝細(xì)小病毒（Novel goose parvovirus-related virus,NGPV）感染可能導(dǎo)致相似的臨床癥狀,本研究建立了可同時(shí)檢測(cè)DuCV-1、DuCV-2和NGPV的三重PCR方法,并對(duì)山東、安徽和江蘇三省采集的脫羽鴨的羽毛囊和各種器官進(jìn)行了檢測(cè),在此基礎(chǔ)上對(duì)臨床病料中的6株DuCV和6株NGPV毒株進(jìn)行了全基因組擴(kuò)增和序列分析,并通過動(dòng)物試驗(yàn)來探討此病發(fā)生的原因,以期為養(yǎng)鴨行業(yè)對(duì)FSS疾病的科學(xué)防控提供了參考依據(jù)。本研究分為四個(gè)部分:1、檢測(cè)DuCV-1、DuCV-2和... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

電鏡下DuCV的形態(tài)（標(biāo)尺代表100nm）（引自Hattermannetal.,2003）

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文3圖1-1電鏡下DuCV的形態(tài)（標(biāo)尺代表100nm）（引自Hattermannetal.,2003）Fig.1-1DuCVmorphologyinEM（barrepresents100nm）（FromHattermannetal.,2003）1.2.3.2DuCV基因組結(jié)構(gòu)DuCV的基因組是長(zhǎng)約1.99kb大小的環(huán)狀單股負(fù)鏈共價(jià)閉合，其基因組為雙義基因組，它的基因組超過200bp大小的的開放閱讀框（Openreadingframe,ORF）主要有6個(gè)，分布在正鏈和負(fù)鏈上，分別為V1、V2、V3以及C1、C2、C3，其次還包括一個(gè)莖環(huán)結(jié)構(gòu)，如圖1-2所示。由于基因組較小，所以DuCV的基因組利用率較高。由于DuCV幾乎無法在體外培養(yǎng)，因此到目前為止，我們主要認(rèn)識(shí)到ORF1、ORF2和ORF3三個(gè)主要開放閱讀框。圖1-2DuCV基因組結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1-2TheStructurepatternofDuCVgenome1.2.3.3DuCV各蛋白的生物學(xué)特性O(shè)RF1基因即V1基因，全長(zhǎng)879bp，由292個(gè)氨基酸組成，位于正義鏈上，位置在49bp-927bp，編碼復(fù)制蛋白（Replicationprotein,Rep），其大小為33.6kDa，Rep基因上存在3個(gè)與滾環(huán)復(fù)制有關(guān)的保守基序，它們成為dNTPs結(jié)合的P環(huán)，此結(jié)構(gòu)與圓環(huán)病毒的復(fù)制有關(guān)。同時(shí)有研究表明，DuCV編碼的Rep蛋白的序列下游有1個(gè)TATA盒，這個(gè)盒子可能在Rep蛋白的表達(dá)控制和調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮一定的作用（Hughesetal.,2008;Wangetal.,2014;Xieetal.,2014）。通過對(duì)不同的圓環(huán)病毒的Rep基因BLAST和Clustal

上，這大大提高了我們的研究效率和拓寬了我們的研究思路。如NGPV和GPV有很近的親緣關(guān)系且結(jié)構(gòu)蛋白相似，因此對(duì)于研究NGPV，我們經(jīng)常參考GPV進(jìn)行研究，甚至有學(xué)者提出NGPV屬于GPV的變異毒株，它們的形態(tài)、理化特性、基因組結(jié)構(gòu)、蛋白功能等基礎(chǔ)特征相似度很高。1.3.3.1基因組結(jié)構(gòu)特征NGPV的全基因組共長(zhǎng)約為5.1kb大小，不同的毒株其全基因組長(zhǎng)度和部分序列也不完全一樣。它主要包含5’端和3’端的兩個(gè)完全一樣的反向重復(fù)序列（InvertedterminalRepeats,ITR）以及左右兩個(gè)互不重疊的開放閱讀框（ORF），其結(jié)構(gòu)如圖1-3所示：圖1.3NGPV基因組結(jié)構(gòu)示意圖Fig.1.3Thesketch-mapofNGPVgenomestructureITR區(qū)域是位于5’端和3’端兩個(gè)完全一致的反向重復(fù)序列，它的大小為444個(gè)核苷酸而且前后兩端完全相同。在兩端的重復(fù)序列的407nt處折疊形成了一個(gè)U型的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)可作為病毒復(fù)制的起始位點(diǎn)（BossisandChiorini,2003），同時(shí)為之后的病毒的包裝提供了順式信號(hào)，用來引導(dǎo)核酸和蛋白的組合，從而完成對(duì)病毒的包裝（Kajjgayaetal.,1991）。而在ITR的發(fā)夾結(jié)構(gòu)，是由181bp的堿基組成了其兩邊的的莖部以及44bp的堿基形成的泡狀區(qū)，在該泡區(qū)頂部是SphΙ的酶切位點(diǎn)。此結(jié)構(gòu)對(duì)于病毒的研究具有重大意義。目前的研究表明，NGPV和GPV的ITR結(jié)構(gòu)與人的細(xì)小病毒B19的ITR結(jié)構(gòu)最為相似（Zhietal.,2004）。在ITR區(qū)域的中間是左右兩個(gè)不同的開放閱讀框（ORF）。左側(cè)開放閱讀框主要由兩個(gè)編碼非結(jié)構(gòu)蛋白（non-structureprotein,NS）即復(fù)制蛋白的基因組成，Rep1和Rep2，

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號(hào)：3292472