該研究以泌乳中期的奶牛乳腺上皮細胞為模型,探索Pten基因的表達與奶牛乳腺發(fā)育和泌乳之間的關系,目的在于揭示Pten基因在奶牛乳腺中的調節(jié)作用,為動物乳腺發(fā)育和泌乳調節(jié)機制的研究提供基礎資料。該研究以中國荷斯坦奶牛作為實驗動物,應用熒光定量q RT-PCR、Westernblotting和免疫組織化學技術,對奶牛不同發(fā)育階段及不同乳品質的乳腺組織中Pten m RNA和蛋白質的相對表達量進行檢測;以體外培養(yǎng)的泌乳中期奶牛乳腺上皮細胞為研究對象,構建重組質粒p GCMV-PtenIRES-EGFP,對細胞進行瞬時轉染,進行Pten基因過表達實驗;應用RNA干擾的方法用Pten si RNA瞬時轉染細胞,進行Pten基因抑制實驗。分別用相關試劑盒檢測Pten基因過表達和抑制之后細胞?-酪蛋白、甘油三酯以及乳糖分泌的情況,為了檢測Pten基因對奶牛乳腺上皮細胞活力和增殖能力的影響,分別應用CASY-TT細胞分析儀和流式細胞儀檢測細胞活性和細胞周期,采用熒光定量q RT-PCR和Western blotting技術,在m RNA和蛋白水平檢測與泌乳相關的信號通路基因的表達變化;同時,添加外源性... 

【文章來源】：科技創(chuàng)新導報. 2016,13(08)

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本文編號：3292307