荷斯坦奶牛（Holstein）具有體格健壯,適應(yīng)性強(qiáng),產(chǎn)奶量大等特點(diǎn),在我國的大部分地區(qū)均有飼養(yǎng)。為增加其產(chǎn)奶量,一種小分子多肽性激素——催乳素（Prolactin,PRL）被應(yīng)用到奶牛催乳過程中。本實(shí)驗(yàn)主要研究PRL對體外培養(yǎng)的乳腺干細(xì)胞的增殖及分化影響。首先利用機(jī)械獲取法純化實(shí)驗(yàn)室已分離的乳腺干細(xì)胞,再通過誘導(dǎo)分化和標(biāo)記基因檢測的方法進(jìn)行鑒定。其次選擇不同濃度PRL刺激乳腺干細(xì)胞,通過MTT法和RealtimePCR研究體外PRL對乳腺干細(xì)胞促進(jìn)增殖和分化的最適濃度。研究結(jié)果如下:1.對機(jī)械獲取法純化的乳腺干細(xì)胞誘導(dǎo),證明其具有分化成骨髓細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的多潛能性,能夠表達(dá)多種干性基因。2.用0、100、300、500、700 ng/mL五個(gè)濃度的PRL對乳腺干細(xì)胞進(jìn)行處理,經(jīng)過MTT法研究分析,500ng/m L PRL對體外乳腺干細(xì)胞具有最適增殖作用。3.用0 ng/mL、100 ng/mL、300 ng/m L、500 ng/mL、700 ng/mL五個(gè)濃度的PRL刺激乳腺干細(xì)胞,分別在0 d、1 d、3 d、5 d、7 d、9 d、11 d和14 d提取細(xì)胞總RNA... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

乳腺干細(xì)胞壁龕假設(shè)模式圖

in 信號通路是機(jī)體發(fā)育、器官成熟和細(xì)胞生長的關(guān)鍵調(diào)控通路[1現(xiàn)，Wnt/β-catenin 信號通路的作用靶點(diǎn)細(xì)胞，極可能是乳腺干細(xì)量 Wnt 蛋白表達(dá)，會導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞中存在干細(xì)胞信號標(biāo)記[1乳腺干細(xì)胞增殖紊亂[19]。β-catenin 是 Wnt 信號通路的關(guān)鍵蛋白的實(shí)驗(yàn)表明加強(qiáng)β-catenin 細(xì)胞內(nèi)含量，可以增加干細(xì)胞在機(jī)體組發(fā)現(xiàn)阻斷β-catenin 在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，能停止乳腺發(fā)育，β-c胞存活因子。路中的 Notch 是一種保守膜蛋白，有促進(jìn)細(xì)胞分裂的作用[24入細(xì)胞核，下游相關(guān)信號啟動，細(xì)胞生長分化隨之受其影響。Doh受體在乳腺干細(xì)胞中合成表達(dá)劇烈，而在其分化的上皮細(xì)胞中到乳腺干細(xì)胞的 1/4~1/2。Notch 信號失調(diào)常發(fā)生在乳腺癌細(xì)胞號通路是機(jī)體組織器官生長發(fā)育調(diào)節(jié)信號網(wǎng)絡(luò)中的常見信號通圖 2 乳腺干細(xì)胞增值和分化可能相關(guān)的途徑[15]Fig 2 Ways of self-renewal and differentiation of MSCs may be involved[15]

操作過程中，為防止局部解凍不均勻造成溫差導(dǎo)致細(xì)胞活性受到影動水槽中的凍存管，使其受熱均勻。解凍后細(xì)胞放入超凈臺中操作。第00 rpm 離心 5 min；第二步棄上清，勿觸及底部沉淀；第三步重懸細(xì)胞損傷細(xì)胞;第四步，以適當(dāng)?shù)募?xì)胞量接種于培養(yǎng)皿中。腺干細(xì)胞的純化與傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁 48h 后，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，用機(jī)械刮除法去除雜質(zhì)細(xì)胞記號筆標(biāo)記干細(xì)胞區(qū)域，用細(xì)胞掛刷或槍頭小心刮除未標(biāo)記區(qū)域。可以到細(xì)胞表型單一，換液繼續(xù)培養(yǎng)。乳腺干細(xì)胞在培養(yǎng)皿中長到 60％~70％匯合時(shí)，掉棄上清培養(yǎng)基，用加緩沖液清洗兩遍，然后加入 0.25％的胰蛋白酶將細(xì)胞消化，當(dāng)大部分細(xì)，加等體積基礎(chǔ)培養(yǎng)基終止消化，用移液器將消化的細(xì)胞加入離心管 1 min，重懸，細(xì)胞計(jì)數(shù)。所得到的 P4 代細(xì)胞一部分?jǐn)U增到 P5 代細(xì)胞，于下一步實(shí)驗(yàn)。1 2

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]乳腺上皮細(xì)胞條件培養(yǎng)基對人脂肪干細(xì)胞增殖和上皮分化的影響[D]. 楊艷清.華中科技大學(xué) 2013

碩士論文
[1]針剌膻中、乳根、足三里治療剖宮產(chǎn)術(shù)后缺乳的臨床比較研究[D]. 王娜.新疆醫(yī)科大學(xué) 2015
[2]TAⅡ小鼠自發(fā)乳腺癌腫瘤相關(guān)差異蛋白研究[D]. 朱悅.天津醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號：3288141