以肺部纖維化和出血性壞死為主要特征的豬傳染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia,PCP）是一種對(duì)養(yǎng)豬業(yè)影響巨大的呼吸道疾病,由胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）感染引起探究其感染肺部致病的分子細(xì)胞機(jī)制,發(fā)現(xiàn)目前市場(chǎng)上的疫苗保護(hù)效果不佳,因此尋找新的疫苗候選分子具有重要意義。宿主在細(xì)菌感染后,會(huì)引起體內(nèi)細(xì)胞因子等產(chǎn)生重要變化,從而調(diào)節(jié)機(jī)體的獲得性免疫,該研究結(jié)果對(duì)于疫苗的。為了了解小鼠在APP感染后,細(xì)胞因子等的變化,進(jìn)行了本研究。APP滴鼻感染小鼠,48h后尸檢或宰殺動(dòng)物,取肺部組織,一部分利用HE染色法觀察肺組織病變,一部分用于Q-PCR方法檢測(cè)干擾素調(diào)節(jié)因子家族（Interferon regulatory factor,IRF）、白介素（Interleukin,IL）因子、toll樣受體（Toll-like receptor,TLR）、腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）等相關(guān)因子的表達(dá)量變化情況。結(jié)果顯示,感染APP后小鼠表現(xiàn)出呼吸困難... 

【文章來(lái)源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
高頻詞對(duì)照表
第一章 前言
    1.豬胸膜肺炎放線桿菌
    2.流行病學(xué)
    3.發(fā)病機(jī)制
        3.1 臨床癥狀和病理變化
        3.2 致病機(jī)制
        3.3 APP毒力因子及致病性
            3.3.1 APP的溶血外毒素(Apx)
            3.3.2 脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)
            3.3.3 菌毛(Fimbriae)
            3.3.4 莢膜多糖
            3.3.5 外膜蛋白(Outer membrane proteins,OMP)
            3.3.6 轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白(Transfer rinbinding peptides,TBP)
    4.診斷
        4.1 常規(guī)鏡檢與病原學(xué)診斷
        4.2 血清學(xué)診斷方法
        4.3 分子生物學(xué)診斷技術(shù)
    5.疫苗的研究現(xiàn)狀
        5.1 滅活疫苗
        5.2 弱毒活疫苗
        5.3 亞單位疫苗
        5.4 基因工程苗
    6.目的和意義
第二章 TLR/NLRs/IRF信號(hào)通路在APP感染致小鼠肺部病變中的作用
    1.材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌種和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 培養(yǎng)基
            1.1.3 試劑
        1.2 方法
            1.2.1 APP培養(yǎng)與小鼠模型建立
            1.2.2 組織石蠟切片的制備
            1.2.3 切片染色
            1.2.4 引物設(shè)計(jì)
            1.2.5 熒光定量PCR
            1.2.6 計(jì)算方法
    2.結(jié)果與分析
        2.1 剖檢和組織病理學(xué)觀察
        2.2 細(xì)胞因子在小鼠肺部表達(dá)水平
        2.3 感染APP小鼠肺部TLR家族表達(dá)水平
        2.4 小鼠感染APP后 IRF家族在肺部表達(dá)量
        2.5 感染APP后小鼠肺部細(xì)胞因子表達(dá)量
    3.討論
第三章 豬胸膜肺炎放線桿菌nlpi基因的克隆和分析
    1.材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌種、質(zhì)粒和培養(yǎng)基
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 引物設(shè)計(jì)
        1.2 方法
            1.2.1 菌株復(fù)蘇和培養(yǎng)
            1.2.2 APP nlpi基因的克隆
            1.2.3 APP nlpi基因分析
    2.結(jié)果與分析
        2.1 APP nlpi基因克隆
        2.2 APP nlpi 的進(jìn)化分析
        2.3 APP nlpi的結(jié)構(gòu)和功能分析
        2.4 APP NLPI與細(xì)菌細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白的相互作用分析
        2.5 與APP NLPI相互作用豬的細(xì)胞膜表面PDZ結(jié)構(gòu)域蛋白的分析
    3.討論
第四章 重組豬胸膜肺炎放線桿菌NLPI蛋白誘導(dǎo)小鼠抗攻擊感染的免疫保護(hù)力研究
    1.材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 菌株、質(zhì)粒和培養(yǎng)基
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 引物設(shè)計(jì)
        1.2 方法
            1.2.1 APP擴(kuò)增
            1.2.2 APP nlpi基因的克隆
            1.2.3 APP nlpi基因分析
            1.2.4 p ET-nlpi重組表達(dá)載體的構(gòu)建
            1.2.5 重組NLPI蛋白(recombinant NLPI,r NLPI)的誘導(dǎo)表達(dá)及純化
            1.2.6 rNLPI的 Western-blot鑒定
            1.2.7 免疫保護(hù)試驗(yàn)
            1.2.8 數(shù)據(jù)處理與分析
    2.結(jié)果與分析
        2.1 APP nlpi基因克隆
        2.2 APP nlpi的進(jìn)化分析
        2.3 APP nlpi的結(jié)構(gòu)和功能分析
        2.4 重組質(zhì)粒p ET-nlpi的構(gòu)建和r NLPI蛋白的檢測(cè)
        2.5 r NLPI的表達(dá)和免疫原性鑒定
        2.6 r NLPI免疫保護(hù)試驗(yàn)誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的血清抗體水平
        2.7 抗攻擊感染的免疫保護(hù)效果觀察
    3.討論
第五章 結(jié)論與創(chuàng)新
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[9]天津部分豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌病與豬傳染性胸膜肺炎的流行病學(xué)調(diào)查[J]. 楊寧寧,張東超,林希,林霖雨,胡曉宇,王彩君,蘇艷紅,金天明.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2016(20)
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博士論文
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[2]中鏈脂肪酸甘油三酯作為免疫佐劑的免疫效果的研究和應(yīng)用[D]. 李麗杰.中國(guó)海洋大學(xué) 2013
[3]大腸埃希菌脂蛋白NlpI參與細(xì)胞分裂的機(jī)制研究[D]. 陶晶.上海交通大學(xué) 2013
[4]胸膜肺炎放線桿菌保守表面蛋白的鑒定與免疫原性研究[D]. 陳夏冰.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[5]豬胸膜肺炎放線桿菌免疫蛋白質(zhì)組學(xué)及亞單位疫苗的研究[D]. 廖永洪.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[6]胸膜肺炎放線桿菌毒素ApxIV的致病性及基因缺失弱毒疫苗的研究[D]. 劉金林.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌三價(jià)滅活疫苗的研制[D]. 王迪.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌ApxⅡA基因原核表達(dá)及其免疫原性研究[D]. 周家強(qiáng).四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]胸膜肺炎放線桿菌毒素蛋白的克隆表達(dá)及多重?zé)晒釶CR診斷方法的研究[D]. 黃琦.廣西大學(xué) 2008
[4]周口市豬傳染性胸膜肺炎流行病學(xué)調(diào)查與防治試驗(yàn)[D]. 王偉.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



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