本研究以RNAi-Ready pSIREN-RetroQZsGreen plasmid為載體,以IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ作為候選基因研究其對(duì)鹿茸生長(zhǎng)的作用機(jī)制,針對(duì)候選基因各構(gòu)建三個(gè)RNAi重組質(zhì)粒,分別命名為pshRNA1-1、pshRNAl-2、pshRNA1-3和pshRNA2-1、 pshRNA2-2、pshRNA2-3,轉(zhuǎn)染至軟骨細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞。應(yīng)用Real-Time PCR和Western blot技術(shù),對(duì)轉(zhuǎn)染48h后的RNAi效果進(jìn)行分析,篩選得到抑制效果最好的干擾組。用于研究目的基因?qū)β谷总浌羌?xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡、周期及自身mRNA和蛋白表達(dá)的作用,探討鹿茸生長(zhǎng)調(diào)節(jié)機(jī)制。研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：（1）所構(gòu)建的三個(gè)IGF-Ⅰ RNAi質(zhì)粒均可顯著降低鹿茸軟骨細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞目的基因的表達(dá)量。其中,pshRNA1-1、pshRNA1-2. pshRNA1-3分別降低了IGF-Ⅰ的mRNA和蛋白表達(dá)水平,且pshRNAl-2的干擾效果最好,對(duì)IGF1mRNA的抑制率達(dá)到60%以上。（2）所構(gòu)建的三個(gè)IGF-ⅡRNAi質(zhì)粒均可顯著降低鹿茸軟骨細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞目的基因的表達(dá)量。... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表(Abbreviation words)
1 前言
    1.1 梅花鹿的概述
        1.1.1 概述
        1.1.2 鹿茸的化學(xué)成分
    1.2 IGF-Ⅰ的研究概況
        1.2.1 IGF-Ⅰ的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 IGF-Ⅰ的作用機(jī)理及與鹿茸生長(zhǎng)的研究
    1.3 IGF-Ⅱ研究概況
        1.3.1 IGF-Ⅱ的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 IGFs受體和結(jié)合蛋白
        1.3.3 IGF-Ⅱ的生理功能與鹿茸生長(zhǎng)的研究
    1.4 RNA干擾技術(shù)研究概況
        1.4.1 RNAi的基本概念
        1.4.2 分子機(jī)制
        1.4.3 siRNA導(dǎo)入哺乳動(dòng)物體內(nèi)的方法
    1.5 RNAi技術(shù)及其應(yīng)用
        1.5.1 基因功能的研究
        1.5.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究
        1.5.3 抗病毒作用
        1.5.4 抗腫瘤作用
        1.5.5 藥物開發(fā)
        1.5.6 研究信號(hào)傳導(dǎo)的新途徑
    1.6 RNAi技術(shù)的應(yīng)用前景
    1.7 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 樣本采集
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
        2.1.3 干擾載體
        2.1.4 主要試劑
        2.1.5 主要溶液及相關(guān)緩沖液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 鹿茸軟骨細(xì)胞及其間充質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
        2.2.2 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ基因RNAi重組干擾質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.3 重組質(zhì)粒克隆及提取
        2.2.4 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染鹿茸軟骨細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞
        2.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QPCR)
        2.2.6 轉(zhuǎn)染后軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞相關(guān)蛋白的Western blot分析
        2.2.7 轉(zhuǎn)染后軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞增殖檢測(cè)
        2.2.8 轉(zhuǎn)染后軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        2.2.9 轉(zhuǎn)染后軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞周期檢測(cè)
    2.3 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其鑒定
    3.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效果檢測(cè)
    3.3 細(xì)胞總RNA的檢測(cè)
    3.4 重組質(zhì)粒的效果鑒定
    3.5 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ沉默抑制軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞增殖
    3.6 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ沉默誘導(dǎo)軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞凋亡
    3.7 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ沉默影響軟骨及間充質(zhì)細(xì)胞周期
4 討論
    4.1 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ?qū)浌羌?xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育的影響
    4.2 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ?qū)浌羌?xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期的影響
    4.3 IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ引起軟骨細(xì)胞及間充質(zhì)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制
5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]“中國(guó)鹿鄉(xiāng)”期待新輝煌[J]. 張憲法.  當(dāng)代畜禽養(yǎng)殖業(yè). 2008(08)
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博士論文
[1]梅花鹿、馬鹿?fàn)I養(yǎng)、血清IGF-1濃度及鹿茸生長(zhǎng)規(guī)律研究[D]. 李光玉.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2005

碩士論文
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[2]吉林白鵝IGFⅡ基因SNP及其與肉用性狀相關(guān)性的研究[D]. 徐晶.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3286983