烏珠穆沁羊是中國(guó)著名的優(yōu)良肉畜品種,為了研究其肌肉生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制,建立體外培養(yǎng)模型,并研究如何提高該肉畜的產(chǎn)肉性能與肉質(zhì)為本研究主要目的。骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞（SMSCs）主要與骨骼肌生長(zhǎng)和修復(fù)相關(guān),因此本研究主要以SMSCs為模型,進(jìn)行分離純化,鑒定與培養(yǎng)特性分析,并誘導(dǎo)其成為脂肪細(xì)胞與骨骼肌細(xì)胞,同時(shí)探討了SMSCs在分化過(guò)程中肌肉與肌內(nèi)脂肪相關(guān)基因的表達(dá)變化。研究結(jié)果表明:通過(guò)改良傳統(tǒng)的細(xì)胞分離方法—原代外植塊培養(yǎng)法,結(jié)合改良的差速貼壁法分離得到了高純度的烏珠穆沁羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞,此方法所得細(xì)胞培養(yǎng)至18代均未出現(xiàn)衰退現(xiàn)象,細(xì)胞仍然能夠保持較好的形態(tài)特征。將所得衛(wèi)星細(xì)胞通過(guò)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)合RT-PCR方法進(jìn)行鑒定,證明所分離得到的細(xì)胞確實(shí)為骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞。培養(yǎng)特性研究結(jié)果表明,所得SMSCs在細(xì)胞匯合度符合要求的前提下,培養(yǎng)周期不能超過(guò)7天;最佳冷凍保護(hù)液配方為40%DMEM/F12+50%胎牛血清+10%DMSO。HE染色結(jié)果證明,所建立烏珠穆沁羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分離純化方法適于建立該細(xì)胞穩(wěn)定細(xì)胞系,且可繼代培養(yǎng)至18代。成肌誘導(dǎo)后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化表明,成肌誘導(dǎo)后的第12天開(kāi)始形成大... 

【文章來(lái)源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：128 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

骨骼肌的構(gòu)成

主要觀察其對(duì)肉雞胴體和雞肉肉質(zhì)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Myf6 基因的野生型A 基因可以調(diào)節(jié)肌纖維的密度和直徑，同時(shí)還能夠提高胸肌重和腿肌重，并且降低肉雞腹脂重和骨骼肌肌纖維密度的作用［64］。另在鴨肉中的研究例如朱春紅等［63］的實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果表明，在高郵鴨和金定鴨的胸肌與腿肌中均有Myf6 基因的表達(dá)，此結(jié)果表明Myf6 基因?qū)喌墓趋兰〖∪獍l(fā)育有著舉足輕重的作用。1.2.3 MyoD 基因概述MyoD 基因是位于MRFs 基因家族上游的調(diào)節(jié)因子，它是生肌調(diào)節(jié)因子家族中的重要成員。它不僅可促使靜止時(shí)期的骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞分化成為成肌細(xì)胞，而且能把其他許多類型的具有多能分化特性的細(xì)胞(比如成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞) 轉(zhuǎn)化為成肌細(xì)胞。而且，在促進(jìn)肌肉特異性基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中，MyoD 起著重要作用，它的作用可以被比喻為基因轉(zhuǎn)錄的總開(kāi)關(guān)。其主要通過(guò)與肌細(xì)胞生成素（MyoG）、肌酸激酶（Creatine Kinase，CK） 、肌球蛋白以及結(jié)蛋白等基因啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合之后發(fā)揮調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活的作用，從而進(jìn)一步促進(jìn)骨骼肌肌纖維的形成（如圖3所示）。

圖 4 bHLH 結(jié)構(gòu)域示意圖Fig.4 Schematic diagram of bHLH domain畜養(yǎng)殖與培育過(guò)程中，應(yīng)該將生長(zhǎng)速度以及瘦肉率放在首要位置, 而肉能力主要與其在初生時(shí)所具備的肌纖維數(shù)量有著密切關(guān)系。且多項(xiàng)MyoG 基因在骨骼肌肌細(xì)胞的形成與增值過(guò)程中均起著中心調(diào)節(jié)作用G 基因的結(jié)構(gòu)以及遺傳變異等方面的研究對(duì)提高家畜生產(chǎn)力的胚胎物生產(chǎn)力的提高都有著不可或缺的理論意義和實(shí)踐指導(dǎo)價(jià)值。TN 基因概述以來(lái)，人們對(duì)肉類食物性狀的改良研究，主要集中在瘦肉率和肉質(zhì)方量是肉畜的主要經(jīng)濟(jì)性狀，其與畜牧業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益是密不可分的。隨發(fā)展，尤其是分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究人員培育出了大量經(jīng)濟(jì)效其共同特點(diǎn)是瘦肉率高，節(jié)省飼料，生長(zhǎng)速度較普通品種快�？茖W(xué)家，在肉畜以上優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀的主效控制基因當(dāng)中，造成牛肌肉 “雙肌也就是肌肉生長(zhǎng)抑制素(MSTN)的影響是最大的。肌肉抑制素是轉(zhuǎn)化生

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]肉羊骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的培養(yǎng)及MRFs基因表達(dá)量的分析[D]. 馮青輝.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
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[3]雞Myf5和Myf6基因的SNP多態(tài)性及其與屠宰性狀和肉質(zhì)性狀的相關(guān)性分析[D]. 孫文浩.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
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本文編號(hào)：3281696