干擾素調(diào)節(jié)因子（IRFs）和核因子κB （NF-κB）是細胞中兩類重要的轉(zhuǎn)錄因子,對于細胞的先天免疫應(yīng)答至關(guān)重要。目前在人的細胞中共發(fā)現(xiàn)了9個IRFs,即IRF-1到IRF-9。其中,IRF-1是首個被發(fā)現(xiàn)的IRFs家族成員,其靶蛋白參與了細胞內(nèi)多種生物學(xué)功能的調(diào)控,包括抗病毒、抗增殖及細胞凋亡等。NF-κB能夠調(diào)控干擾素-p、炎癥因子以及白介素等基因的表達,在細胞的免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。泡沫病毒（FVs）是一類特殊的反轉(zhuǎn)錄病毒,與其他反轉(zhuǎn)錄病毒相比,FVs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及生活周期具有諸多獨特之處。FVs在體外培養(yǎng)的細胞中能夠引起強烈的細胞病變,在其天然宿主中卻處于潛伏感染狀態(tài),并不引發(fā)任何癥狀。目前關(guān)于FVs處于潛伏感染狀態(tài)的具體機制尚不清楚。本室前期研究發(fā)現(xiàn)牛泡沫病毒（BFV）通過激活HeLa細胞的NF-κB通路上調(diào)了RelB的表達,RelB作為BFV反式激活因子BTas的輔因子增強了BTas介導(dǎo)的對LTR的反式激活作用,進而促進了BFV的復(fù)制。然而,NF-κB的激活并不能使BFV由潛伏感染狀態(tài)向裂解感染狀態(tài)轉(zhuǎn)換,推測BFV有可能通過NF-κB激活了其他抗病毒因子。... 

【文章來源】：南開大學(xué)天津市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第一章 引言
    第一節(jié) 泡沫病毒
        1.1.1 泡沫病毒的基本生物學(xué)特征
        1.1.2 泡沫病毒的基因表達調(diào)控
            1.1.2.1 泡沫病毒反式激活因子Tas概述
            1.1.2.2 泡沫病毒基因表達時序模型
        1.1.3 泡沫病毒的宿主范圍及致病性
    第二節(jié) 病毒及其誘導(dǎo)的先天免疫應(yīng)答
        1.2.1 病毒誘導(dǎo)干擾素和炎癥因子產(chǎn)生的機制
            1.2.1.1 宿主模式識別受體(PRR)介導(dǎo)的信號通路
            1.2.1.2 干擾素調(diào)節(jié)因子家族(IRFs)
                1.2.1.2.1 IRF-1概述
                    1.2.1.2.1.1 IRF-1的表達及活性調(diào)節(jié)
                    1.2.1.2.1.2 IRF-1與病毒的相互作用
                    1.2.1.2.1.3 IRF-1的其他功能
                1.2.1.2.2 IRF-2概述
                1.2.1.2.3 其他IRFs概述
            1.2.1.3 細胞的NF-κB信號通路
                1.2.1.3.1 NF-κB信號通路概述
                1.2.1.3.2 NF-κB的經(jīng)典和非經(jīng)典通路
        1.2.2 干擾素的抗病毒活性
            1.2.2.1 干擾素介導(dǎo)ISGs產(chǎn)生的信號通路
            1.2.2.2 干擾素誘導(dǎo)蛋白(ISGs)
        1.2.3 泡沫病毒與宿主先天免疫系統(tǒng)
            1.2.3.1 FV與NF-κB信號通路
            1.2.3.2 FV與干擾素
            1.2.3.3 FV與干擾素誘導(dǎo)蛋白
        1.2.4 IFP35概述
            1.2.4.1 IFP35的結(jié)構(gòu)與主要功能
            1.2.4.2 IFP35的表達調(diào)控
            1.2.4.3 IFP35具有抑制BFV復(fù)制的作用
        1.2.5 小結(jié)
    第三節(jié) 本研究的目的和意義
        1.3.1 本研究的前期基礎(chǔ)
        1.3.2 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    第一節(jié) 實驗材料
        2.1.1 細胞
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 主要試劑
    第二節(jié) 實驗方法
        2.2.1 基因操作
        2.2.2 蛋白的表達純化
        2.2.3 細胞培養(yǎng)
        2.2.4 細胞轉(zhuǎn)染
        2.2.5 蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 熒光素酶活性測定
        2.2.8 BFV指示細胞系分析
        2.2.9 5'-cDNA末端快速擴增分析
        2.2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀
        2.2.11 電泳遷移率阻滯實驗
        2.2.12 RNA提取及反轉(zhuǎn)錄
        2.2.13 實時定量PCR
第三章 結(jié)果
    第一節(jié) IRF-1介導(dǎo)干擾素對IFP35的誘導(dǎo)表達
        3.1.1 IFP35轉(zhuǎn)錄起始位點及啟動子活性分析
        3.1.2 Ⅰ型和Ⅱ型干擾素通過ISRE激活了IFP35的啟動子
            3.1.2.1 ISRE介導(dǎo)了Ⅰ型干擾素對IFP35啟動子的激活
            3.1.2.2 ISRE介導(dǎo)了Ⅱ型干擾素對IFP35啟動子的激活
        3.1.3 IRF-1通過ISRE激活了IFP35的表達
            3.1.3.1 IRF-1可以激活I(lǐng)FP35的啟動子
            3.1.3.2 IRF-1通過ISRE激活I(lǐng)FP35的表達
        3.1.4 IRF-1參與了Ⅰ型干擾素對IFP35的激活
        3.1.5 IRF-1參與了Ⅱ型干擾素對IFP35的激活
            3.1.5.1 IFN-γ對IFP35的激活需要IRF-1
            3.1.5.2 在IFN-γ的刺激下,IRF-1可以結(jié)合在IFP35的啟動子上
            3.1.5.3 IFN-γ通過STAT-1/IRF-1通路激活I(lǐng)FP35的表達
        3.1.6 IRF-1參與了NIK對IFP35的激活
        3.1.7 IRF-2、組成活化型的IRF-3及IRF-7可以激活I(lǐng)FP35的表達
    第二節(jié) IRF-1抑制BFV復(fù)制
        3.2.1 BFV感染可誘導(dǎo)IRF-1表達
            3.2.1.1 BFV感染導(dǎo)致IRF-1表達上調(diào)
            3.2.1.2 BTas通過NF-κB通路激活I(lǐng)RF-1的表達
        3.2.2 IRF-1抑制BFV復(fù)制
            3.2.2.1 IRF-1可抑制BFV復(fù)制
            3.2.2.2 IRF-1可抑制BFV基因的轉(zhuǎn)錄
            3.2.2.3 IRF-1抑制BFV復(fù)制效應(yīng)基因初探
第四章 討論
    第一節(jié) IFP35表達調(diào)控及其與BFV感染的關(guān)系
        4.1.1 IFP35啟動子順式作用元件分析
        4.1.2 IRFs激活I(lǐng)FP35的表達分析
        4.1.3 BFV感染不影響HeLa細胞內(nèi)源IFP35表達的可能原因
    第二節(jié) IRF-1與BFV感染的博弈
        4.2.1 BFV激活I(lǐng)RF-1表達
        4.2.2 IRF-1在宿主抑制BFV復(fù)制中的貢獻
第五章 結(jié)論與展望
    第一節(jié) 結(jié)論
    第二節(jié) 展望
參考文獻
致謝
附錄1 英文縮寫
附錄2 個人簡歷
附錄3 在學(xué)期間發(fā)表的論文與研究成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]牛泡沫病毒調(diào)節(jié)蛋白功能及其在LTR上應(yīng)答元件的研究[J]. 劉佳建,王世珍,張莉,喬文濤,陳啟民,耿運琪.  病毒學(xué)報. 2000(02)
[2]Borf-1蛋白是牛泡沫病毒的反式激活因子[J]. 劉佳建,劉淑紅,陳啟民,耿運琪.  科學(xué)通報. 1999(08)
[3]牛泡沫病毒（BSV）3026毒株的分離及分子生物學(xué)鑒定[J]. 劉淑紅,陳荷新,陳家童,梁棟,陳啟民,耿運琪,Ｗｏｏｄ.Ｃ．.  病毒學(xué)報. 1997(02)



本文編號：3279365