根據(jù)藍(lán)舌病病毒8型（BTV-8） VP2基因序列（Seg-2）設(shè)計(jì)特異性引物和探針,建立了BTV-8實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR（RT-qPCR）檢測(cè)方法。結(jié)果表明該法特異性強(qiáng),能準(zhǔn)確檢測(cè)BTV-8核酸,與藍(lán)舌病病毒其他血清型病毒、鹿流行性出血熱病毒（EHDV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、口蹄疫病毒（FMDV）等病原核酸無(wú)交叉反應(yīng);最低可檢測(cè)核酸濃度為2.8×10³ copies/mL;Ct值組內(nèi)和組間變異系數(shù)（CV）均小于2%。用所建立方法對(duì)115份臨床樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果均為陰性,與文獻(xiàn)報(bào)道的方法檢測(cè)結(jié)果一致。建立的RT-qPCR方法可用于BTV-8的臨床檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查。 

【文章來(lái)源】：動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2020,41(08)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

RT-qPCR特異性檢測(cè)結(jié)果

將10倍梯度稀釋的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品(濃度:2.8×109 copies/mL～2.8×104 copies/mL)進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè),每個(gè)濃度做3個(gè)重復(fù),得到擴(kuò)增曲線(圖2)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖3)。ABI 7500 Fast System SDS software V1.4軟件繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(slope)為-3.639,截距(intercept)為49.806,相關(guān)系數(shù)(R2)為0.998,各稀釋度間呈良好線性關(guān)系。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:y=-3.639x+49.806。對(duì)所檢測(cè)樣品進(jìn)行定量時(shí),可將樣品Ct值代入方程,計(jì)算出樣品的拷貝數(shù)。圖3 RT-qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線

RT-qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]藍(lán)舌病病毒和流行性出血病病毒雙重?zé)晒舛縍T-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J]. 楊振興,朱建波,李占鴻,李卓然,何于雯,謝佳芮,李華春,廖德芳,楊恒.  中國(guó)獸醫(yī)科學(xué). 2019(09)



本文編號(hào)：3273547