根據(jù)藍舌病病毒8型（BTV-8） VP2基因序列（Seg-2）設計特異性引物和探針,建立了BTV-8實時熒光定量RT-PCR（RT-qPCR）檢測方法。結果表明該法特異性強,能準確檢測BTV-8核酸,與藍舌病病毒其他血清型病毒、鹿流行性出血熱病毒（EHDV）、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）、口蹄疫病毒（FMDV）等病原核酸無交叉反應;最低可檢測核酸濃度為2.8×10³ copies/mL;Ct值組內(nèi)和組間變異系數(shù)（CV）均小于2%。用所建立方法對115份臨床樣品進行檢測,結果均為陰性,與文獻報道的方法檢測結果一致。建立的RT-qPCR方法可用于BTV-8的臨床檢測和流行病學調查。 

【文章來源】：動物醫(yī)學進展. 2020,41(08)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

RT-qPCR特異性檢測結果

將10倍梯度稀釋的質粒標準品(濃度:2.8×109 copies/mL～2.8×104 copies/mL)進行RT-qPCR檢測,每個濃度做3個重復,得到擴增曲線(圖2)和標準曲線(圖3)。ABI 7500 Fast System SDS software V1.4軟件繪制的標準曲線斜率(slope)為-3.639,截距(intercept)為49.806,相關系數(shù)(R2)為0.998,各稀釋度間呈良好線性關系。得到標準曲線方程為:y=-3.639x+49.806。對所檢測樣品進行定量時,可將樣品Ct值代入方程,計算出樣品的拷貝數(shù)。圖3 RT-qPCR標準曲線

RT-qPCR標準曲線

【參考文獻】：
期刊論文
[1]藍舌病病毒和流行性出血病病毒雙重熒光定量RT-PCR檢測方法的建立及應用[J]. 楊振興,朱建波,李占鴻,李卓然,何于雯,謝佳芮,李華春,廖德芳,楊恒.  中國獸醫(yī)科學. 2019(09)



本文編號：3273547