綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞來源于胎盤合體滋養(yǎng)層,位于母胎界面,大部分位于胎盤子葉中,其功能主要是轉(zhuǎn)移和運(yùn)輸胎兒所需的營養(yǎng)物質(zhì)、進(jìn)行氣體交換、分泌多種激素,并保護(hù)胎兒免受母體免疫系統(tǒng)的損傷。體外培養(yǎng)得到較高純度的綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞可以為后續(xù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞生長研究和細(xì)胞生物學(xué)特性測定等試驗(yàn)提供細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ),可為研究病毒與宿主的互作提供細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。本試驗(yàn)選取妊娠中期的綿羊胎盤子葉作為取樣部位,采用胰蛋白酶和膠原酶兩步消化法分離培養(yǎng)細(xì)胞,通過倒置相差顯微鏡觀察滋養(yǎng)層細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn),應(yīng)用常規(guī)HE染色和免疫組織化學(xué)染色法,透射電子顯微鏡技術(shù)對綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行鑒定。倒置相差顯微鏡下,滋養(yǎng)層細(xì)胞為雙核及多核細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)為上皮樣細(xì)胞,呈片狀鋪展生長。常規(guī)HE染色結(jié)果表明胎盤子葉部位存在大量多核滋養(yǎng)層細(xì)胞,培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞出現(xiàn)雙核及多核現(xiàn)象；對胎盤子葉與培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞用細(xì)胞角蛋白7（CK7）進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,胎盤子葉多核滋養(yǎng)層細(xì)胞與培養(yǎng)的滋養(yǎng)層細(xì)胞胞質(zhì)區(qū)域結(jié)果均為棕色陽性信號；利用透射電鏡技術(shù),在電鏡下可見滋養(yǎng)層細(xì)胞表面微絨毛發(fā)達(dá),胞質(zhì)內(nèi)有較多膜包小泡及豐富的微絲和脂滴。本試驗(yàn)應(yīng)用... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

結(jié)締紙毛膜型胎盤

(cotyledonary placenta ),絨毛膜上的絨毛集合成群，稱為線毛葉或子葉(cotyledon)。母體子宮內(nèi)形成的子宮肉阜（亦稱母體子葉）（圖2)與城毛葉相對應(yīng)，子宮肉阜處上皮被侵燭，使絨毛葉上皮直接和子宮內(nèi)膜的結(jié)締組織接觸，共同形成胎盤突圖2綿羊胎盤及子葉位置Fig2 The posit ion of sheep placenta and cotyledons域毛膜的滋養(yǎng)層細(xì)胞在妊娠中期可分成兩種類型：合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞。細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞有絲分裂活躍，形成新的滋養(yǎng)層細(xì)胞，新滋養(yǎng)層細(xì)胞膜消失，融合形成合體滋養(yǎng)層細(xì)胞。在合體滋養(yǎng)層內(nèi)不久出現(xiàn)一些小的腔隙，稱滋養(yǎng)層陷窩，并相互連通成網(wǎng)。接著合體滋養(yǎng)層侵燭子宮內(nèi)膜中充滿母體血液的血竇壁，使陷窩、血竇相通，母體血進(jìn)入陷窩，流經(jīng)滋養(yǎng)層，子宮胎盤循環(huán)建立1.1.2綿羊絨毛膜、合體滋養(yǎng)層細(xì)胞和胎盤的生理功能■ 域毛膜的生理功能十分重要。域毛膜是浸浴在紙毛間隙的母液中的，從母血中吸收02和營養(yǎng)物質(zhì)，并排出C02和代謝廢物。級毛膜還有重要的內(nèi)分泌功能

圖5稀釋的Percol丨分層液的分層現(xiàn)象及細(xì)胞與亞細(xì)胞圖示（摘自Margaret G, et al. 2006) Schematic representation of expected locations of diluted Percoll solutions and cell types (From Margaret al. 2006)動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存.1冷凍保存的主要目的動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存的主要目的是保存種子細(xì)胞，以便隨時(shí)取用。同時(shí)，冷細(xì)胞長期保存的最好方法，有利于減少細(xì)胞被微生物污染和細(xì)胞之間交叉險(xiǎn)，減少細(xì)胞因傳代培養(yǎng)而引起的遺傳變異和形態(tài)改變以及避免有限細(xì)胞老或惡性轉(zhuǎn)化。大多數(shù)無特別的要求的細(xì)胞，都可冷凍保存于-i3(rc以下。動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存，為細(xì)胞培養(yǎng)工作帶來很大的機(jī)動(dòng)靈活性，降低了人及財(cái)力的消耗。.2冷凍保存要點(diǎn)當(dāng)含細(xì)胞的懸浮液溫度低于凝固點(diǎn)時(shí)，冰晶幵始形成，溶質(zhì)濃度也相對地

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]綿羊多核絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J]. 王專家,張宇飛,劉淑英.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(01)
[2]牛胚胎骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化[J]. 邊艷超,何曉紅,牧仁,李向臣,馬月輝,李云章,關(guān)偉軍.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2013(11)
[3]綿羊胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞的體外培養(yǎng)與鑒定[J]. 劉慧,劉淑英,劉麗珍,張宇飛.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2012(03)



本文編號：3273399