天然冬蟲夏草是一種名貴的中藥,資源稀缺。為充分開發(fā)冬蟲夏草的自然資源,本論文對引進的一株冬蟲夏草無性型-中華被毛孢（Hirsutella sinensis, EMI-20）開展發(fā)酵工藝與利用研究。首先對菌株進行形態(tài)與分子鑒定。首先從形態(tài)學上初步觀察實驗菌株EMI-20,并且與劉錫琎、尹小武、何蘇琴所描述的形態(tài)進行對照,對照東京大學的環(huán)境掃描電鏡菌絲體觀察結(jié)果,最終證明與他們所描述的相一致。在分子水平上,實驗株的18SrDNA序列與中山大學的相似性高達99%,另外通過ITS的系統(tǒng)發(fā)生分析表明：實驗菌株EMI-20的序列與NCBI上選取的冬蟲夏草和中華被毛孢序列同源性高達90%以上。采用單因素優(yōu)化、正交優(yōu)化和液體深層發(fā)酵中華被毛孢,以改良的YPD培養(yǎng)基為初始培養(yǎng)基,最終,在深層發(fā)酵水平的最佳培養(yǎng)基為：2%葡萄糖、0.5%蛋白胨、0.1%酵母粉、KH2PO40.05%、MgSO4?7H2O0.05%、VB10.01%。利用5L發(fā)酵罐,在17℃下培養(yǎng)11d,可獲得菌絲體生物量達到19.37g/L。相比較于劉永霞、王燦等人于18℃下的搖瓶培養(yǎng)結(jié)果：30d生物量為18.94g/L、16d生物量2.... 

【文章來源】：福建師范大學福建省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
中文文摘
目錄
緒論
    1 冬蟲夏草的概況
        1.1 冬蟲夏草的生活史及其生態(tài)分布
        1.2 冬蟲夏草的研究歷史
        1.3 冬蟲夏草的功能
        1.4 冬蟲夏草無性型研究
    2 冬蟲夏草的培養(yǎng)
        2.1 冬蟲夏草的人工培養(yǎng)
        2.2 冬蟲夏草的半人工培養(yǎng)
        2.3 無性型的培養(yǎng)
    3 中草藥或中華被毛孢于南美白對蝦養(yǎng)殖技術的應用
        3.1 中草作為南美白對蝦的飼料添加劑的現(xiàn)狀
        3.2 對蝦免疫和解毒機能的指標
    4 研究的目的與意義
第一章 冬蟲夏草無性型的鑒定
    1.1 引言
    1.2 實驗材料和試劑
        1.2.1 實驗材料
        1.2.2 實驗試劑
        1.2.3 實驗儀器
        1.2.4 主要培養(yǎng)基和溶液
    1.3 實驗方法
        1.3.1 菌絲體形態(tài)學的觀察
        1.3.2 電子顯微鏡觀察菌絲體
        1.3.3 基因組DNA提取
        1.3.4 基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳分析
        1.3.5 18S、ITS序列擴增
        1.3.6 18S、ITS序列擴增瓊脂糖凝膠電泳分析
        1.3.7 膠回收參照膠回收試劑盒
        1.3.8 序列測定與系統(tǒng)發(fā)生分析
    1.4 實驗結(jié)果
        1.4.1 中華被毛孢形態(tài)學觀察
        1.4.2 中華被毛孢菌絲顯微結(jié)構觀察
        1.4.3 中華被毛孢菌絲環(huán)境掃描電子顯微鏡觀察
        1.4.5 中華被毛孢EMI-20總基因組DNA的提取
        1.4.6 中華被毛孢EMI-20的18S、ITS基因的PCR擴增
        1.4.7 中華被毛孢EMI-20的ITS系統(tǒng)發(fā)生分析
    1.5 小結(jié)
第二章 中華被毛孢的液體培養(yǎng)
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與試劑
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗試劑
        2.2.3 實驗儀器
        2.2.4 主要培養(yǎng)基和溶液
    2.3 實驗方法
        2.3.1 菌種的活化
        2.3.2 搖瓶單因素實驗優(yōu)化
        2.3.3 搖瓶正交實驗優(yōu)化
        2.3.4 溫度、裝液量對中華被毛孢的生長特性的研究
        2.3.5 搖瓶生長特性的研究
        2.3.6 液體深層發(fā)酵放大培養(yǎng)
        2.3.7 生物量的測定
        2.3.8 發(fā)酵液中的葡萄糖含量的測定
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 單因素實驗優(yōu)化
        2.4.2 正交實驗優(yōu)化
        2.4.3 沮度、裝液量的優(yōu)化
        2.4.4 中華被毛孢生長特性研究
        2.4.5 中華被毛孢液體深層發(fā)酵培養(yǎng)
    2.5 小結(jié)
第三章 中華被毛孢作為飼料添加劑在南美白對蝦養(yǎng)殖中的應用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料與試劑
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗飼料與添加劑
        3.2.3 實驗分組以及飼養(yǎng)管理
        3.2.4 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 南美白對蝦的生長指標的測定
        3.3.2 南美白對蝦的免疫以及解毒代謝指標的測定
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 南美白對蝦的生長指標
        3.4.2 南美白對蟲下的生長指標
        3.4.3 南美白對蝦的免疫指標
        3.4.4.解毒代謝指標的測定
    3.5 小結(jié)
        3.5.1 中華被毛孢添加劑對南美白對蝦生長指標的影響
        3.5.2 中華被毛孢添加劑對南美白對蝦免疫力的影響
        3.5.3 中華被毛孢添加劑對南美白對蝦解毒代謝酶的影響
第四章 結(jié)論與展望
參考文獻
攻讀學位期間承擔的科研任務與主要成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]冬蟲夏草和中國被毛孢形態(tài)學再研究[J]. 何蘇琴,王三喜,羅進倉,李風慶,金秀琳,文朝慧,馬福全,周昭旭,唐德志.  微生物學通報. 2011(11)
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[9]我國冬蟲夏草及其資源保護、開發(fā)利用對策[J]. 胡清秀,寥超子,王欣.  中國農(nóng)業(yè)資源與區(qū)劃. 2005(05)
[10]冬蟲夏草無性型的分離培養(yǎng)和菌絲顯微結(jié)構的觀察[J]. 劉彥威,蘇敬良,韓博,趙德明,田向榮,田紹進.  黑龍江畜牧獸醫(yī). 2005(10)

博士論文
[1]冬蟲夏草無性型培養(yǎng)與鑒定及其抗腫瘤機制的研究[D]. 劉彥威.中國農(nóng)業(yè)大學 2005

碩士論文
[1]冬蟲夏草無性型的鑒定和生長特性研究[D]. 尹小武.上海交通大學 2009
[2]中華絨螯蟹及中國對蝦幾種生化指標變化的研究[D]. 蘇建國.西北農(nóng)林科技大學 2001



本文編號：3260789