陰道毛滴蟲(chóng)誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱的研究
發(fā)布時(shí)間：2021-06-29 22:00
陰道毛滴蟲(chóng)在世界范圍內(nèi)分布廣泛感染率較高,可能是最常見(jiàn)的通過(guò)性傳播的人獸共患原蟲(chóng)。陰道毛滴蟲(chóng)一般寄生在人體內(nèi),也可以感染猴等動(dòng)物。人感染陰道毛滴蟲(chóng)后,會(huì)產(chǎn)生陰道炎及尿道炎等癥狀,并且陰道毛滴蟲(chóng)感染與艾滋病病毒、乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒的感染有關(guān)[1]。胞外陷阱對(duì)機(jī)體抵御病原入侵具有重要作用,已有研究發(fā)現(xiàn)牛艾美爾球蟲(chóng)、新孢子蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)等原蟲(chóng)刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生了胞外陷阱。胞外陷阱可以捕獲入侵的原蟲(chóng),并且有些胞外陷阱對(duì)原蟲(chóng)具有殺傷作用[2]。賈第蟲(chóng)也可刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱[3],但是同為鞭毛蟲(chóng)的陰道毛滴蟲(chóng)是否能刺激細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱并釋放活性氧（ROS）等物質(zhì)阻礙病原入侵,目前尚未見(jiàn)報(bào)道。THP-1細(xì)胞是人外周血單核細(xì)胞系,本試驗(yàn)應(yīng)用掃描電子顯微鏡觀察了陰道毛滴蟲(chóng)刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的胞外陷阱;應(yīng)用激光共聚焦檢測(cè)了陰道毛滴蟲(chóng)刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的胞外陷阱的成分;應(yīng)用活性氧檢測(cè)試劑盒檢測(cè)了陰道毛滴蟲(chóng)刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時(shí)ROS的水平;應(yīng)用乳酸脫氫酶（LDH）檢測(cè)試劑盒檢測(cè)了陰道毛滴蟲(chóng)刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時(shí)...
【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
陰道毛滴蟲(chóng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胞外陷阱掃描電子顯微鏡檢測(cè)結(jié)果
第二篇 研究?jī)?nèi)容 第 1 章 陰道毛滴蟲(chóng)刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱的檢測(cè).2 陰道毛滴蟲(chóng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胞外陷阱激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果胞外陷阱的基本成分包括 DNA、MPO、H3。為了進(jìn)一步證明陰道毛滴激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生了胞外陷阱，我們用陰道毛滴蟲(chóng)：THP-1：2:1 的比例刺HP-1 細(xì)胞 1 小時(shí)。隨后使用抗組蛋白 H3 的單克隆抗體作為一抗，使用帶色熒光標(biāo)簽的抗體分別標(biāo)記 H3 和 MPO。最后用帶有紅色熒光標(biāo)簽的 DN料 SYTOX Orange 進(jìn)行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下分別進(jìn)行 H3、M DNA 的共定位。如圖可知，通過(guò) MPO 與 DNA 的共定位，可以觀察到 TH胞釋放胞外陷阱捕獲了陰道毛滴蟲(chóng)（圖 1.2a，2b，2c），通過(guò) H3 與 DNA定位，可以觀察到 THP-1 細(xì)胞釋放的細(xì)長(zhǎng)的胞外陷阱（圖 1.2d，2e，2f）。
e merges;活性氧（ROS）的檢測(cè)為了檢測(cè)陰道毛滴蟲(chóng)刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時(shí)是否產(chǎn)生了活驗(yàn)采用 ROS 檢測(cè)試劑盒對(duì)其進(jìn)行了檢測(cè)。將 DCFH-DA 探針裝載至 T后洗去沒(méi)有裝載上的探針，以 THP-1：陰道毛滴蟲(chóng)：2:1 的比例刺激 T 1h，然后在熒光酶標(biāo)儀上檢測(cè)熒光強(qiáng)度。酵母聚糖（Zymosan）與佛蔻乙酸酯（PMA）是目前公認(rèn)的誘導(dǎo)胞外陷阱產(chǎn)生的陽(yáng)性刺激物，本酵母聚糖（Zymosan）作為誘導(dǎo)產(chǎn)生胞外陷阱的陽(yáng)性刺激物。結(jié)果表滴蟲(chóng)刺激組和酵母聚糖（Zymosan）刺激組的 ROS 產(chǎn)生量顯著提高，照組相比差異顯著。這說(shuō)明陰道毛滴蟲(chóng)刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱 ROS（圖 1.3）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗陰道毛滴蟲(chóng)AP33單克隆抗體的制備及其功能初探[J]. 黃慧聰,俞石芳,蔡敏,譚峰,鄭曉云,潘長(zhǎng)旺. 中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2007(02)
本文編號(hào)：3257240
【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
陰道毛滴蟲(chóng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胞外陷阱掃描電子顯微鏡檢測(cè)結(jié)果
第二篇 研究?jī)?nèi)容 第 1 章 陰道毛滴蟲(chóng)刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱的檢測(cè).2 陰道毛滴蟲(chóng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的胞外陷阱激光共聚焦檢測(cè)結(jié)果胞外陷阱的基本成分包括 DNA、MPO、H3。為了進(jìn)一步證明陰道毛滴激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生了胞外陷阱，我們用陰道毛滴蟲(chóng)：THP-1：2:1 的比例刺HP-1 細(xì)胞 1 小時(shí)。隨后使用抗組蛋白 H3 的單克隆抗體作為一抗，使用帶色熒光標(biāo)簽的抗體分別標(biāo)記 H3 和 MPO。最后用帶有紅色熒光標(biāo)簽的 DN料 SYTOX Orange 進(jìn)行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下分別進(jìn)行 H3、M DNA 的共定位。如圖可知，通過(guò) MPO 與 DNA 的共定位，可以觀察到 TH胞釋放胞外陷阱捕獲了陰道毛滴蟲(chóng)（圖 1.2a，2b，2c），通過(guò) H3 與 DNA定位，可以觀察到 THP-1 細(xì)胞釋放的細(xì)長(zhǎng)的胞外陷阱（圖 1.2d，2e，2f）。
e merges;活性氧（ROS）的檢測(cè)為了檢測(cè)陰道毛滴蟲(chóng)刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時(shí)是否產(chǎn)生了活驗(yàn)采用 ROS 檢測(cè)試劑盒對(duì)其進(jìn)行了檢測(cè)。將 DCFH-DA 探針裝載至 T后洗去沒(méi)有裝載上的探針，以 THP-1：陰道毛滴蟲(chóng)：2:1 的比例刺激 T 1h，然后在熒光酶標(biāo)儀上檢測(cè)熒光強(qiáng)度。酵母聚糖（Zymosan）與佛蔻乙酸酯（PMA）是目前公認(rèn)的誘導(dǎo)胞外陷阱產(chǎn)生的陽(yáng)性刺激物，本酵母聚糖（Zymosan）作為誘導(dǎo)產(chǎn)生胞外陷阱的陽(yáng)性刺激物。結(jié)果表滴蟲(chóng)刺激組和酵母聚糖（Zymosan）刺激組的 ROS 產(chǎn)生量顯著提高，照組相比差異顯著。這說(shuō)明陰道毛滴蟲(chóng)刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱 ROS（圖 1.3）。
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗陰道毛滴蟲(chóng)AP33單克隆抗體的制備及其功能初探[J]. 黃慧聰,俞石芳,蔡敏,譚峰,鄭曉云,潘長(zhǎng)旺. 中國(guó)寄生蟲(chóng)學(xué)與寄生蟲(chóng)病雜志. 2007(02)
本文編號(hào)：3257240
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