陰道毛滴蟲在世界范圍內(nèi)分布廣泛感染率較高,可能是最常見的通過性傳播的人獸共患原蟲。陰道毛滴蟲一般寄生在人體內(nèi),也可以感染猴等動物。人感染陰道毛滴蟲后,會產(chǎn)生陰道炎及尿道炎等癥狀,并且陰道毛滴蟲感染與艾滋病病毒、乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒的感染有關(guān)^[1]。胞外陷阱對機(jī)體抵御病原入侵具有重要作用,已有研究發(fā)現(xiàn)牛艾美爾球蟲、新孢子蟲、弓形蟲等原蟲刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生了胞外陷阱。胞外陷阱可以捕獲入侵的原蟲,并且有些胞外陷阱對原蟲具有殺傷作用^[2]。賈第蟲也可刺激免疫細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱^[3],但是同為鞭毛蟲的陰道毛滴蟲是否能刺激細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱并釋放活性氧（ROS）等物質(zhì)阻礙病原入侵,目前尚未見報(bào)道。THP-1細(xì)胞是人外周血單核細(xì)胞系,本試驗(yàn)應(yīng)用掃描電子顯微鏡觀察了陰道毛滴蟲刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的胞外陷阱;應(yīng)用激光共聚焦檢測了陰道毛滴蟲刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生的胞外陷阱的成分;應(yīng)用活性氧檢測試劑盒檢測了陰道毛滴蟲刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時ROS的水平;應(yīng)用乳酸脫氫酶（LDH）檢測試劑盒檢測了陰道毛滴蟲刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時... 

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【學(xué)位級別】：碩士

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陰道毛滴蟲誘導(dǎo)產(chǎn)生的胞外陷阱掃描電子顯微鏡檢測結(jié)果

第二篇 研究內(nèi)容 第 1 章 陰道毛滴蟲刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱的檢測.2 陰道毛滴蟲誘導(dǎo)產(chǎn)生的胞外陷阱激光共聚焦檢測結(jié)果胞外陷阱的基本成分包括 DNA、MPO、H3。為了進(jìn)一步證明陰道毛滴激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生了胞外陷阱，我們用陰道毛滴蟲：THP-1：2:1 的比例刺HP-1 細(xì)胞 1 小時。隨后使用抗組蛋白 H3 的單克隆抗體作為一抗，使用帶色熒光標(biāo)簽的抗體分別標(biāo)記 H3 和 MPO。最后用帶有紅色熒光標(biāo)簽的 DN料 SYTOX Orange 進(jìn)行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下分別進(jìn)行 H3、M DNA 的共定位。如圖可知，通過 MPO 與 DNA 的共定位，可以觀察到 TH胞釋放胞外陷阱捕獲了陰道毛滴蟲（圖 1.2a，2b，2c），通過 H3 與 DNA定位，可以觀察到 THP-1 細(xì)胞釋放的細(xì)長的胞外陷阱（圖 1.2d，2e，2f）。

e merges;活性氧（ROS）的檢測為了檢測陰道毛滴蟲刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱時是否產(chǎn)生了活驗(yàn)采用 ROS 檢測試劑盒對其進(jìn)行了檢測。將 DCFH-DA 探針裝載至 T后洗去沒有裝載上的探針，以 THP-1：陰道毛滴蟲：2:1 的比例刺激 T 1h，然后在熒光酶標(biāo)儀上檢測熒光強(qiáng)度。酵母聚糖（Zymosan）與佛蔻乙酸酯（PMA）是目前公認(rèn)的誘導(dǎo)胞外陷阱產(chǎn)生的陽性刺激物，本酵母聚糖（Zymosan）作為誘導(dǎo)產(chǎn)生胞外陷阱的陽性刺激物。結(jié)果表滴蟲刺激組和酵母聚糖（Zymosan）刺激組的 ROS 產(chǎn)生量顯著提高，照組相比差異顯著。這說明陰道毛滴蟲刺激 THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生胞外陷阱 ROS（圖 1.3）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗陰道毛滴蟲AP33單克隆抗體的制備及其功能初探[J]. 黃慧聰,俞石芳,蔡敏,譚峰,鄭曉云,潘長旺.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2007(02)



本文編號：3257240