發(fā)布時間：2021-06-28 20:35

　　將截短的雞傳染性支氣管炎病毒S1基因在干酪乳桿菌中表達,經(jīng)黏膜途徑免疫雞,誘導(dǎo)機體產(chǎn)生全身系統(tǒng)的免疫應(yīng)答及局部的黏膜免疫。通過RT-PCR方法擴增IBV S1目的基因片段并連接在pQE-30載體上,表達并純化蛋白;將S1基因片段構(gòu)建在穿梭質(zhì)粒pLA上轉(zhuǎn)化到大腸桿菌表達系統(tǒng),鑒定正確后,提取質(zhì)粒電轉(zhuǎn)化到干酪乳桿菌中,所得的重組菌菌株命名為pLA-IBV S1/L.casei。Western blot檢測重組菌表達目的蛋白S1,得到約60kDa的融合蛋白,與預(yù)期結(jié)果相符,說明S1蛋白可以與抗IBV多抗血清發(fā)生特異性反應(yīng),具有很好反應(yīng)原性。間接免疫熒光顯示重組pLA-S1/L.casei在熒光顯微鏡下可見綠色熒光,表明重組干酪乳桿菌表達了外源目的蛋白。流式細胞儀可以檢測出重組干酪乳桿菌菌體發(fā)光,重組干酪乳桿菌表達IBV S1蛋白表達率為86.88%。激光共聚焦可以檢測到菌體在熒光顯微鏡下發(fā)光,明視野與綠色熒光Merge顯示,是在菌體表面發(fā)光,激光共聚焦結(jié)果顯示外源蛋白能夠在干酪乳桿菌表面展示。為了確定重組pLA-S1/L.casei的免疫原性,應(yīng)用獲得的重組干酪乳桿菌經(jīng)口服和滴鼻點眼兩種途徑... 

【文章來源】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

S1基因PCR擴增

圖 2-2 pMD18-T-S1 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定結(jié)果tion of the recombinant plasmid pMD18-T-S1 by douM2.DNA Marker DL 2000；1-2.重組質(zhì)粒經(jīng) BamH3.pMD18-T-S1 重組質(zhì)粒

圖 2-3 pMD18-T-S1 重組質(zhì)粒的 PCR 鑒定 Identification of the recombinant plasmid pMD18-T-S1 bM.DNA 標準 DL 2000；1.PCR 產(chǎn)物；2.陰性對照源性比較

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]干酪乳桿菌表面展示IBDV VP2蛋白及其免疫效力的研究[D]. 林紅麗.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2014
[3]共表達ETEC K99、K88重組干酪乳桿菌的構(gòu)建及其免疫研究[D]. 溫麗娟.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 2011



本文編號：3255008