目的：檢測丹參酮ⅡA磺酸鈉（STS）對PRRSV感染后的Marc-145細(xì)胞中自噬相關(guān)基因ATG5、Beclin1、ATG7 mRNA表達(dá)量和蛋白合成的影響。STS對豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV） N基因的表達(dá)量和N蛋白合成的影響,初步探討STS抗病毒作用的機(jī)制。方法：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（qRT-PCR）檢測STS對Marc-145細(xì)胞中自噬相關(guān)基因ATG5、ATG7和Beclin1以及PRRSV N基因表達(dá)的影響。Western blot檢測ATG5、ATG7和Beclin1和N蛋白合成的影響。同時(shí)通過間接免疫熒光試驗(yàn)研究STS對PRRSV N蛋白表達(dá)的影響,初步探討STS的抗病毒機(jī)制。結(jié)果：1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR （qRT-PCR）和western blot結(jié)果顯示在12hpi、24hpi、36hpi時(shí)STS能夠抑制ATG5、ATG7和Beclin1 mRNA和蛋白的合成。且24hpi、36hpi時(shí)0.0625mg/mlSTS、0.03125mg/mlSTS抑制ATG5效果好于0.125mg/ml利巴韋林。36hpi時(shí)0.0625mg/mlSTS抑制Beclinl的效... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＰＲＲＳＶ基閃謝．結(jié)構(gòu)??打ｇ．?１?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ＰＲＲＳＶ?Ｇｅｎｏｍｅ??．

??有四條保守的信號通路參與自隨體的形成（圖２盧７１?ＡＴＧ１酶復(fù)合物（ＡＴＧ１－ＡＴＧ１３－??ＡＴＧ１７）在起始階段調(diào)控自倦體的形成，其機(jī)制是通過識別雷帕霉素範(fàn)標(biāo)（ｍＴＯ巧信號??趴１。液泡分掠蛋白Ｖｐｄ４－Ｖｐｓ３０復(fù)合體，在哺乳動(dòng)物中稱為ＦＤＧ－ｉｎ－Ｂｅｃｌｉｎ－ｌ復(fù)合體。??ＰＤＯ－ｍ－Ｂｅｃｌｉｎ－ｌ復(fù)合體促進(jìn)早期自倦體的形成是通妊調(diào)控誘導(dǎo)稱酸肌醇的量的多少??－７－??

圖４不同時(shí)間點(diǎn)ＳＴＳ對ＡＴＧＳｍＲＮＡ表達(dá)量影響??Ｆｉｇ．４?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＳＴＳ?０打?ＡＴＧ５?ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｔ?出ｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｍｅ?ｐｏｉｎｔｓ??相對定量結(jié)果如表１?（Ｔ沁ｌｅｌ）和圖４?（Ｆｉｇ．４）所示，在１２ｈｐｉ時(shí)ＰＲＲＳＶ組ＡＴＧ５基因??表達(dá)量高于細(xì)胞對照組（Ｐ＞〇．〇５）；?ＰＲＲＳＶ組ＡＴＧ５基因表達(dá)量在２４ｈｐｉ、３６ｈｐｉ時(shí)高于細(xì)??胞對照組（Ｐ＜０．０５）。在?１２ｈｐｉ、２４ｈｐｉ、％ｈｐｉ時(shí)０．０６２５ｍｇ／ｍｌＳＴＳ處理組、０．０３１２５ｍｇ／ｍｌＳＴＳ??－２７－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬繁殖與呼吸綜合征病毒結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J]. 張松林,沈志強(qiáng),劉磊,馬永彪,劉吉山.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(11)
[2]Marc-145細(xì)胞培養(yǎng)條件摸索及其初步應(yīng)用[J]. 蘭海楠,張輝,崔煥忠,杜東菊,孔金超,趙小麗,鄭鑫.  中國畜牧獸醫(yī). 2011(05)
[3]Influence of Hypericum perforatum Extract on Piglet Infected with Porcine Respiratory and Reproductive Syndrome Virus[J]. PU Xiu-ying1, 3, LIANG Jian-ping2, 3, SHANG Ruo-feng3, WANG Xue-hong3, WANG Zuo-xin1, 3, HUA Lan-ying3 and LIU Yu3 1 College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, P.R.China 2 Institute of Modern Physics, Chinese Academy of Sciences, Lanzhou 730000, P.R.China 3 Lanzhou Institute of Animal and Veterinary Pharmaceutics Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730050, P.R. China.  Agricultural Sciences in China. 2009(06)
[4]丹參藥理學(xué)活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀[J]. 劉艾林,李銘源,王一濤,杜冠華.  中國藥學(xué)雜志. 2007(09)
[5]從疑似PRRS流產(chǎn)胎兒分離PRRSV的研究[J]. 郭寶清,陳章水,劉文興,崔益洙.  中國畜禽傳染病. 1996(02)

博士論文
[1]PRRSV感染誘導(dǎo)細(xì)胞自噬及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的機(jī)制研究[D]. 陳全剛.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013

碩士論文
[1]抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）天然化合物的體外篩選及其抗病毒機(jī)制研究[D]. 孫娜.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]與PRRSV核衣殼蛋白相互作用的宿主蛋白的篩選與驗(yàn)證[D]. 李婷婷.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[3]藍(lán)耳病毒RX株的分離鑒定和中藥體外抗病毒的作用研究[D]. 李丹.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3251663