為了探明尿激酶型纖溶酶原激活劑（uPA）與其特異性受體uPAR對體外牛卵母細(xì)胞核成熟的可能作用,本研究采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)探討了未成熟的牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（cumulus-oocyte complexes,COCs）中uPA和uPAR的蛋白定位與表達(dá);采用地衣紅染色技術(shù)研究了體外成熟培養(yǎng)3h、6h與12h后uPA對牛卵母細(xì)胞核成熟進(jìn)程的可能影響;采用競爭性酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測了體外成熟培養(yǎng)6h后uPA、Amiloride（uPA活性抑制劑）與uPAR一抗對牛COCs和牛卵母細(xì)胞中cAMP水平變化的可能調(diào)節(jié)作用。結(jié)果表明:（1）uPAR在牛卵丘與卵母細(xì)胞上均有表達(dá),而uPA僅在卵丘細(xì)胞上表達(dá)。（2）與對照組相比較,添加外源uPA分別處理3h、6h與12h后,牛卵母細(xì)胞核成熟進(jìn)程均被顯著延遲（P<0.05）;該作用可以被uPA活性抑制劑Amiloride抵消。（3）體外成熟6h后,添加外源uPA能夠提升牛COCs與卵母細(xì)胞中cAMP水平,與對照組相比差異顯著（P<0.05）;同時利用Amiloride抑制uPA活性與uPAR抗體阻斷受體信號后,uPA對cAMP的促進(jìn)作用... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

卵母細(xì)胞的形成

圖 2 環(huán)腺苷酸的分子結(jié)構(gòu)Fig.2 The molecular structure of cAMP[76]AMP 在卵母細(xì)胞發(fā)育及卵泡發(fā)生中的作用細(xì)胞成熟的前提條件是卵母細(xì)胞具有恢復(fù)被卵泡環(huán)境阻滯在 GV的能力。研究發(fā)現(xiàn)，卵泡細(xì)胞中的 cAMP 是維持卵母細(xì)胞減數(shù)分[58]。卵母細(xì)胞中高水平的 cAMP 會使卵母細(xì)胞維持在核網(wǎng)期，而平會使其具有第一次減數(shù)分裂恢復(fù)能力[45]。卵母細(xì)胞中由 cAMP同調(diào)控其含量，且這兩種酶又同時受到它們上游其他分子、激素作用[59]。cAMP 不僅能夠影響卵母細(xì)胞和卵泡的發(fā)育，而且在卵起到極為重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，在排卵前 LH 峰的作用下，使P 水平驟升，從而促進(jìn)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的恢復(fù)[58,60]；然而，在在高水平 cAMP 的前提下才可以實(shí)現(xiàn)維持卵母細(xì)胞減數(shù)分裂停滯減數(shù)分裂恢復(fù)過程中的卵母細(xì)胞內(nèi)低水平 cAMP 與其周圍卵丘P 同時存在。

uPA和uPAR蛋白在牛卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體中的表達(dá)Fig.3ExpressionofuPAanduPARproteinsinonebovinecumulus-oocytecomplex


本文編號：3248450