目前,家禽業(yè)出現(xiàn)繁殖力持續(xù)下降,每年商業(yè)品種中淘汰10%左右的弱精子癥雞。為探討公雞弱精子癥的發(fā)生機制,本研究通過建立弱精子癥人工模型并對正常公雞和弱精子癥公雞進行精液品質(zhì)測定、形態(tài)學(xué)觀察；同時通過TaqMan實時熒光定量PCR （Real-Time qPCR, RT-qPCR）法,檢測調(diào)控精子發(fā)生的關(guān)鍵基因-Piwill在不同類型生精細胞內(nèi)mRNA表達水平,進一步確定該基因在家禽精子發(fā)生過程中的功能。實驗結(jié)果如下：1.利用白消安構(gòu)建了弱精子癥人工模型,與對照組相比,處理組的精液量、精子活率和精子密度隨著白消安處理時間的增加而顯著降低,而精子畸形率則顯著提高。白消安處理7d后,曲精細管上皮開始脫落,處理19d后生精上皮上的精子細胞層和部分精母細胞開始脫落,處理25d后曲精細管上皮只剩下精原細胞層。精液涂片結(jié)果顯示,對照組和處理組精液密度差異顯著（P<0.05）,且處理組的精液密度隨著白消安處理時間增加而降低。2.自發(fā)弱精子癥中,重度弱精子癥組精液量和精液密度顯著低于其他組；正常組的精子畸形率顯著低于弱精子癥組,而精子活力則顯著高于弱精子癥組。正常組公雞精液密度和中度弱精及重度弱精... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 文獻綜述
    1 Piwi研究進展
        1.1 Piwi的發(fā)現(xiàn)
        1.2 Piwi的生物學(xué)功能
            1.2.1. Piwi在生殖干細胞維持中的功能
            1.2.2. Piwi在配子發(fā)生中的功能
            1.2.3. Piwi在體細胞中的功能
    2 家禽精子發(fā)生
        2.1 精子發(fā)生
        2.2 精子發(fā)生過程
        2.3 睪丸功能結(jié)構(gòu)
        2.4 家禽減數(shù)分裂
    3 雞弱精子癥研究現(xiàn)狀
    4 精液品質(zhì)
        4.1 精液品質(zhì)評定指標(biāo)
        4.2 精液品質(zhì)影響因素
    5 流式細胞術(shù)
        5.1 流式細胞術(shù)發(fā)展歷史
        5.2 流式細胞術(shù)原理及應(yīng)用
            5.2.1 流式細胞儀系統(tǒng)流程
            5.2.2 流式細胞儀工作原理
        5.3 細胞參量
    6 實時熒光定量PCR
        6.1 RT-qPCR常用檢測方法及原理
            6.1.1. SYBR Green染料法
            6.1.2. TaqMan探針法
        6.2 實時熒光定量PCR的幾個常用術(shù)語
        6.3 實驗數(shù)據(jù)分析方法
    7 本實驗的研究目的和意義
第二章 雞弱精子癥人工模型的建立及弱精子癥形成因素的初步研究
    1. 引言
    2. 實驗材料
        2.1. 實驗動物
        2.2. 主要儀器
        2.3. 主要試劑
    3. 實驗方法
        3.1. 白消安建立弱精子癥人工模型
            3.1.1. 弱精子癥模型建立
            3.1.2. 樣品采集及數(shù)據(jù)測定
        3.2. 精液品質(zhì)測定
            3.2.1. 精液量
            3.2.2. 精子密度
            3.2.3. 精子活力
            3.2.4. 精子活率
            3.2.5. 精子畸形率
        3.3. 形態(tài)學(xué)分析
            3.3.1. 睪丸石蠟切片制作
            3.3.2. 精液涂片
        3.4. 數(shù)據(jù)分析
    4. 結(jié)果與分析
        4.1. 公雞飼養(yǎng)情況及毒性觀察
        4.2. 精液品質(zhì)測定
            4.2.1. 自發(fā)弱精子癥與正常公雞精液品質(zhì)比較分析
            4.2.2. 弱精子癥模型精液品質(zhì)比較分析
        4.3. 形態(tài)學(xué)觀察
            4.3.1. 睪丸組織石蠟切片
            4.3.2. 精液涂片
    5. 討論
第三章 Piwill在不同類型生精細胞中mRNA轉(zhuǎn)錄的研究
    1. 引言
    2. 實驗材料
        2.1. 實驗動物
        2.2. 主要實驗儀器
        2.3. 主要實驗試劑及配制
    3. 實驗方法
        3.1. 雞生精細胞的分離和鑒定
            3.1.1 雞原始生殖細胞(PGCs)分離與鑒定
            3.1.2 雞精原干細胞(SSCs)分離與鑒定
            3.1.3 雞睪丸內(nèi)生精細胞分離與鑒定
            3.1.4 雞成熟精子的純化
        3.2 總RNA的提取與質(zhì)量檢測
            3.2.1 Trizol法提取總RNA及RNA質(zhì)量檢測
            3.2.2 石蠟切片RNA的提取與質(zhì)量檢測
        3.3 反轉(zhuǎn)錄及RT-qPCR
            3.3.1 RNA樣品的反轉(zhuǎn)錄
            3.3.2 引物的設(shè)計與合成
            3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒的稀釋及拷貝數(shù)的計算
            3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.4 RNA樣品的檢測
    4 實驗結(jié)果
        4.1 雞PGCs的鑒定
        4.2 雞SSCs的鑒定
        4.3 流式細胞分選
            4.3.1 雞精原(母)細胞
            4.3.2 圓形精細胞
        4.4 純化的精子細胞
        4.5 TaqMan RT-qPCR
            4.5.1 生精細胞RNA檢測的TaqMan RT-qPCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            4.5.2 生精細胞RNA的Ct值及絕對拷貝數(shù)
            4.5.3. 弱精子癥睪丸組織的TaqMan RT-qPCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
            4.5.4. 弱精子癥Ct值及絕對拷貝數(shù)
    5 討論
全文結(jié)論
參考文獻
致謝
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本文編號：3248239