發(fā)布時間：2021-06-24 22:11

　　干細胞研究自興起以來,一直是自然科學(xué)研究領(lǐng)域的熱點。骨髓間充質(zhì)干細胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）作為一種易于獲得培養(yǎng)的成體多潛能干細胞,被認為是干細胞研究的理想種子細胞。豬作為理想的動物模型,其生理結(jié)構(gòu),臟器大小,營養(yǎng)代謝及病理反應(yīng)等與人體較為相似。故本研究以成體巴馬小型豬骨髓組織為實驗材料,利用全骨髓貼壁培養(yǎng)法得到巴馬小型豬BMSCs,并對其進行鑒定,重點研究了豬骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖及其多向分化潛能等生物學(xué)特性。1、以巴馬小型豬骨髓組織為材料,選用全骨髓貼壁培養(yǎng)法分離得到巴馬小型豬BMSCs,并使用優(yōu)化培養(yǎng)體系（L-DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%FBS+2mM L-谷氨酰胺+1Ong/mL bFGF+10ng/mL EGF+100X青鏈霉素混合液）培養(yǎng)細胞,共培養(yǎng)傳代至16代,細胞具有較強的體外自我更新能力。2、利用免疫組織化學(xué)法和RT-PCR特異性基因檢測法對體外培養(yǎng)的巴馬小型豬BMSCs進行檢測。結(jié)果顯示：巴馬小型豬BMSCs陽性表達CD29、CD44、CD71、CD73和CD90這五種間充質(zhì)干細胞特異性表面標記物,陰性表達... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

原代細胞培養(yǎng)情況

但從16代幵始，細胞形態(tài)變?yōu)殚L條狀或扁圓型，邊緣不光滑，傳代時，細胞的貼壁能力明顯降低，增殖速度明顯減慢，細胞出現(xiàn)空泡化、核固縮等衰老特征（圖1-4P)。-19 -

對巴馬小型豬BMSCs P3代細胞進行特異性標記物免疫組織化學(xué)檢測。結(jié)果見(圖1-5)。結(jié)果表明：巴馬小型豬BMSCs P3代細胞表達MSCs的表面標記物：CD29、CD44和CD73且細胞形態(tài)良好，可作為鑒定巴馬小型豬BMSCs的依據(jù)。議圓圓A:綠色焚光標記B:DAPI C:疊加 D:相差圖1-5巴馬小型豬BMSCs表面標記免疫焚光檢測Fig. 1-5 Identification of BMSCs surface markers using immunofluorescence2.4.2巴馬小型豬BMSCs表面標記的RT-PCR檢測選取7種巴馬小型豬BMSCs特異性基因序列：CD90、CD73、CD71、CD44、CD34、CD31和CD29，對巴馬小型豬BMSCs P3、P9和P15進行檢測。結(jié)果表明：三個代次的巴馬小型豬BMSCs陽性表達CD90、CD73、CD7K CD44和CD29,陰性表達內(nèi)皮細胞特異性標le物CD31和造血干細胞特異性標記物CD34。（圖1-6-1)。使用Gel-Pr0 analyzer軟件分析，隨著細胞代次的升高三個陽性表達基因的表達量呈下降趨勢，并且，在同一代次屮，CD73和CD29基因的表達量略高于其他三種基因（圖1-6-2)。9-21 -

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]成人骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的研究進展[J]. 李亞,趙勇剛,梁萍.  河南科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2009(02)
[5]骨髓源神經(jīng)干細胞對神經(jīng)膠質(zhì)瘤趨化性的研究[J]. 張建富,孟慶海,金澎,劉廣義.  中華實驗外科雜志. 2009 (04)
[6]骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)分化特征[J]. 胡資兵,曾榮,郭偉韜,林顥.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(43)
[7]兩種體外分離成人骨髓間充質(zhì)干細胞方法的比較[J]. 楊芬,楊乃龍.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(03)
[8]體外誘導(dǎo)小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞分化為肝樣細胞[J]. 俞瑞珺,劉海林.  世界華人消化雜志. 2007(34)
[9]骨髓基質(zhì)干細胞成脂分化的調(diào)控及其對骨質(zhì)疏松的影響[J]. 龐婷婷,崔燎.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2007(09)
[10]畜禽遺傳資源保存理論與方法研究進展[J]. 陳巖鋒,謝喜平.  福建畜牧獸醫(yī). 2007(04)

碩士論文
[1]人骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)及向肝樣細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究[D]. 陳美娟.浙江大學(xué) 2009
[2]大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞誘導(dǎo)成骨及VEGF因子的表達[D]. 金家峰.中國醫(yī)科大學(xué) 2008
[3]成鼠骨髓基質(zhì)細胞向神經(jīng)干細胞誘導(dǎo)分化的實驗研究[D]. 趙英杰.青島大學(xué) 2006



本文編號：3247914