鎘是一種高毒性的環(huán)境和工業(yè)污染物,急性或慢性鎘暴露能引起多種器官和組織的損傷。鎘可以引起血腦屏障功能障礙,進(jìn)入腦組織引起神經(jīng)元凋亡,臨床研究表明鎘是導(dǎo)致兒童學(xué)習(xí)障礙和神經(jīng)退行性疾病發(fā)生的重要原因。微摩爾級的鎘能引起絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路的激活,導(dǎo)致線粒體的功能紊亂、線粒體膜電位下降、通透性發(fā)生變化、線粒體內(nèi)物質(zhì)釋放進(jìn)入胞漿。但是線粒體途徑在鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡過程中的作用機(jī)制仍存在疑問。本研究以體外培養(yǎng)大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元和PC12細(xì)胞為模型,通過體外試驗(yàn)探討線粒體途徑在鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制,MAPK的激活在線粒體途徑中的作用,以及乙酰半胱氨酸（NAC）在上述過程中的保護(hù)作用。1、鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡為研究鎘對神經(jīng)細(xì)胞的凋亡作用,不同濃度（0、5、10、20μmol/L）醋酸鎘處理原代細(xì)胞和PC12細(xì)胞12h或24h,MTT法測定細(xì)胞存活率,Annexin V-FITC染色法測定細(xì)胞凋亡率。結(jié)果表明,隨著鎘劑量的增加,神經(jīng)細(xì)胞的存活率逐漸下降,12h和24h各劑量染鎘組細(xì)胞存活率均顯著或極顯著（P<0.05或P<0.01）低于對照組；隨著鎘劑量的增加,細(xì)... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
目錄
符號說明
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 鎘的神經(jīng)毒性
        1 鎘的簡介
        2 鎘的神經(jīng)毒性
    第二章 鎘與線粒體
        1 線粒體的簡介
            1.1 線粒體的結(jié)構(gòu)和生理功能
            1.2 線粒體基因組
            1.3 線粒體的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)
        2 鎘對線粒體的影響
            2.1 線粒體基因的表達(dá)
            2.2 線粒體質(zhì)量與呼吸活動
            2.3 線粒體內(nèi)膜的通透性和膜電位
        3 線粒體凋亡途徑
    第三章 鎘與MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1 MAPK途徑的簡介
        2 鎘對MAPK途徑的影響
    參考文獻(xiàn)
第二部分 試驗(yàn)研究
    第一章 鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
            1.3 主要儀器
            1.4 主要化學(xué)試劑
            1.5 大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元(原代細(xì)胞)的分離與培養(yǎng)
            1.6 PC 12細(xì)胞的培養(yǎng)
            1.7 MTT法檢測鎘對神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響
            1.8 Annexin V-FITC熒光染色法檢測鎘對神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的影響
            1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        2 結(jié)果
            2.1 鎘對神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響
            2.2 鎘對神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第二章 鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
            1.3 主要儀器
            1.4 主要化學(xué)試劑
            1.5 大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            1.6 PC 12細(xì)胞的培養(yǎng)
            1.7 線粒體與胞漿成分的制備
            1.8 免疫印跡檢測線粒體途徑相關(guān)蛋白表達(dá)
            1.9 MTT法檢測鎘對神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響
            1.10 Hoechst 33258染色觀察原代細(xì)胞核形態(tài)的變化
            1.11 免疫熒光染色檢測AIF和EndoG核轉(zhuǎn)位
            1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2 結(jié)果
            2.1 鎘對神經(jīng)細(xì)胞Cyt C釋放的影響
            2.2 鎘對神經(jīng)細(xì)胞Caspase-3和PARP蛋白活化的影響
            2.3 鎘對神經(jīng)細(xì)胞Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響
            2.4 鎘與Z-VAD-fmk對原代細(xì)胞的影響
            2.5 鎘對PC12細(xì)胞AIF和Endo G核轉(zhuǎn)移的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的MAPK途徑
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
            1.3 主要儀器
            1.4 主要化學(xué)試劑
            1.5 大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元的分離與培養(yǎng)
            1.6 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)
            1.7 免疫印跡檢測MAPK途徑相關(guān)蛋白表達(dá)
            1.8 免疫組化染色觀察
            1.9 MTT法檢測鎘對神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響
            1.10 Annexin V-FITC熒光染色法檢測鎘對神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的影響
            1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2 結(jié)果
            2.1 鎘對PC12細(xì)胞MAPK蛋白活化的影響
            2.2 免疫組化染色法檢測原代細(xì)胞p-ERK、p-JNK、p-p38 MAPK蛋白的表達(dá)
            2.3 MAPK通路特異性抑制劑對MAPK蛋白表達(dá)水平的影響
            2.4 MAPK抑制劑對神經(jīng)細(xì)胞存活率的影響
            2.5 MAPK抑制劑對神經(jīng)細(xì)胞凋亡率的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第四章 ERK、JNK調(diào)節(jié)鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的線粒體途徑
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
            1.3 主要儀器
            1.4 主要化學(xué)試劑
            1.5 大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
            1.6 PC 12細(xì)胞的培養(yǎng)
            1.7 線粒體與胞漿成分的制備
            1.8 免疫印跡檢測線粒體途徑相關(guān)蛋白表達(dá)
            1.9 免疫熒光染色
            1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2 結(jié)果
            2.1 抑制ERK磷酸化對鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡線粒體途徑相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            2.2 抑制JNK磷酸化對鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡線粒體途徑相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
            2.3 抑制ERK、JNK磷酸化對鎘誘導(dǎo)PC12細(xì)胞AIF和Endo G核轉(zhuǎn)位的抑制作用
        3 討論
        4 參考文獻(xiàn)
    第五章 NAC在鎘誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用
        1 材料和方法
            1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
            1.2 主要儀器
            1.3 主要化學(xué)試劑
            1.4 PC12細(xì)胞的培養(yǎng)
            1.5 MTT法檢測鎘對PC12細(xì)胞存活率的影響
            1.6 PC12細(xì)胞凋亡率的測定
            1.7 PC12細(xì)胞SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA含量的測定
            1.8 線粒體與胞漿成分的制備
            1.9 免疫印跡檢測線粒體途徑相關(guān)蛋白表達(dá)
            1.10 免疫熒光染色
            1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2 結(jié)果
            2.1 NAC對鎘致PC12細(xì)胞存活率影響的保護(hù)作用
            2.2 NAC對鎘致PC12細(xì)胞凋亡率影響的保護(hù)作用
            2.3 NAC對鎘致PC12細(xì)胞SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA含量變化的影響
            2.4 NAC對鎘誘導(dǎo)PC12細(xì)胞Caspase依賴性凋亡的影響
            2.5 NAC對鎘致PC12細(xì)胞AIF和Endo G核轉(zhuǎn)位的影響
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文結(jié)論
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Chloride intracellular channel 1 regulates colon cancer cell migration and invasion through ROS/ERK pathway[J]. Pan Wang,Yun Zeng,Tao Liu,Chao Zhang,Pei-Wu Yu,Ying-Xue Hao,Hua-Xin Luo,Gang Liu.  World Journal of Gastroenterology. 2014(08)
[2]線粒體凋亡通路的研究進(jìn)展[J]. 鄭天勝,李翔.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(18)
[3]Neurotoxicity and Biomarkers of Lead Exposure: a Review[J]. Kang-sheng Liu,Jia-hu Hao,Yu Zeng,Fan-chun Dai,Ping-qing Gu.  Chinese Medical Sciences Journal. 2013(03)
[4]鎘對胎鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡與一氧化氮合酶基因mRNA轉(zhuǎn)錄的影響[J]. 袁燕,江辰陽,孫婭,徐卉,劉學(xué)忠,顧建紅,卞建春,劉宗平.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2013(01)
[5]鎘對大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA轉(zhuǎn)錄的影響[J]. 袁燕,孫婭,江辰陽,劉學(xué)忠,顧建紅,卞建春,劉宗平.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2012(11)
[6]Oxidative Stress and Apoptotic Changes of Rat Cerebral Cortical Neurons Exposed to Cadmium in Vitro[J]. YUAN Yan,BIAN Jian Chun,LIU Xue Zhong,ZHANG Ying,SUN Ya,and LIU Zong Ping# College of Veterinary Medicine,Yangzhou University,Yangzhou 225009,Jiangsu,China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2012(02)
[7]重金屬污染事件應(yīng)急處理技術(shù)探討——以廣西龍江鎘污染事件為例[J]. 郎慶成,張玲,趙斌,蘇玉娟,趙海運(yùn).  再生資源與循環(huán)經(jīng)濟(jì). 2012(03)
[8]利培酮和奧氮平對精神分裂癥患者血漿非酶類抗氧化物水平的影響[J]. 溫盛霖,程敏鋒,王厚亮.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2011(09)
[9]乙酰半胱氨酸對鉛致大鼠腎臟皮質(zhì)氧化損傷的保護(hù)效應(yīng)[J]. 陳大偉,王林,劉學(xué)忠,袁燕,顧建紅,卞建春,劉宗平.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(01)
[10]超氧化物歧化酶（SOD）及其研究進(jìn)展[J]. 張欣.  內(nèi)蒙古石油化工. 2010(16)

博士論文
[1]鎘致大鼠肝BRL 3A細(xì)胞的毒性機(jī)理及NAC的保護(hù)作用[D]. 張義冉.揚(yáng)州大學(xué) 2013
[2]谷胱甘肽及衍生物與金屬離子相互作用理論研究[D]. 劉建華.江南大學(xué) 2012
[3]鎘對大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞毒性損傷的機(jī)制[D]. 袁燕.揚(yáng)州大學(xué) 2012
[4]鉛鎘聯(lián)合對大鼠腎臟的毒性研究[D]. 王林.揚(yáng)州大學(xué) 2009
[5]N-乙酰半胱氨酸和亞硒酸鈉對鎘致大鼠肝腎損傷的影響及鎘致293細(xì)胞凋亡影響因素的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 王雨.中國醫(yī)科大學(xué) 2006
[6]GSH對氧自由基介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡保護(hù)機(jī)制研究[D]. 張菁.天津醫(yī)科大學(xué) 2002

碩士論文
[1]水體中鎘暴露對草魚的氧化脅迫研究[D]. 田鵬.西南大學(xué) 2013
[2]鎘對小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡作用及相關(guān)影響因素的研究[D]. 周新華.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3247908