球蟲病是一種全球性寄生蟲病，危害極其嚴重，它的病原是寄生于細胞內(nèi)的一種原蟲——艾美耳球蟲。球蟲病可使雞只增重減少，飼料轉(zhuǎn)化率下降，有較高死亡率，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。據(jù)統(tǒng)計，全世界每年大約有超過350億只雞受到雞球蟲病的威脅，因球蟲病造成的直接經(jīng)濟損失高達5億英鎊。目前雞球蟲病的控制方法主要是使用抗球蟲藥物進行預防，但是雞球蟲抗藥性日益嚴重，而且人們對食品安全問題越來越關(guān)注，所以人們期望找到更為理想的防治球蟲病的方法，以減少或者完全替代抗球蟲藥物的使用。通過疫苗免疫來預防球蟲病，將在球蟲病防治中發(fā)揮越來越重要的作用。核酸疫苗作為第三代疫苗，具有安全、穩(wěn)定、高效且使用方便的特點，能夠同時誘導細胞免疫和體液免疫反應，而且同時表達細胞因子作為免疫佐劑，可以顯著增強DNA疫苗的免疫效果，誘導更為廣泛和持久的體液免疫和細胞免疫，將是有效控制雞球蟲病的最佳選擇。本文選擇致病力最為嚴重的柔嫩艾美耳球蟲抗原基因，與真核表達載體pCAGGS連接，制備了核酸疫苗，并對其免疫保護性進行了初步研究，為進一步研究雞球蟲DNA疫苗提供了一定的基礎(chǔ)。1．柔嫩艾美耳球蟲4種基因（EtAMA1、EtSerpin、... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DNA疫苗構(gòu)建的基本特征

圖 1.2 DNA 疫苗的作用機理Fig. 1.2 Mechanism of action of DNA vaccine酸疫苗免疫效果的影響因素響核酸疫苗免疫效果的因素有多種：①Kozak 序列。為使真核表達質(zhì)粒最優(yōu)化，密碼子上游應該有一個 Kozak 序列（GCCA/GCC），這可增強真核基因的翻譯效 poly-A 信號序列下游有一個增強子。②接種次數(shù)和劑量。一般地，接種次數(shù)越多越高；不同動物個體，接種劑量不同：小鼠肌內(nèi)注射量為 10-100 μg，小動物需要物或人需要 0.5-2.5 mg。但是如果使用基因槍注射，只需要百分之一的量（Dunham過適當?shù)膬?yōu)化，重組質(zhì)�？梢栽隗w內(nèi)表達想要的目的抗原蛋白（Dunham，2002；03；Babiuk et al.，2007）。但是，為了誘導有效的免疫應答反應，抗原蛋白需要和保持他們的三級結(jié)構(gòu)。③免疫佐劑。良好的免疫佐劑配合疫苗使用可以增強機，不同的佐劑所產(chǎn)生的免疫效果也不盡相同。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有效的免疫佐劑有 Hsp-7002），細胞因子（Min et al.，2001；Stevenson，2004；Manoj et al.，2004；Dham微粒制劑，配合非離子型阻斷共聚物或聚合陽離子（Manoj et al.，2004）等。A 疫苗由于宿主的阻抗、不合適的轉(zhuǎn)染方法和表達水平低等因素使其效果不理想

20 μL 5 min，然后進入以下循環(huán)：94℃72℃延伸 10 min，結(jié)束后進行電泳段連接到 pGEM-Teasy 載體上，轉(zhuǎn)酶進行酶切鑒定。鑒定為陽性的克結(jié)果及序列分析一條大小約為 1400 bp 的條帶，與體連接，構(gòu)建的重組質(zhì)粒 pGEM-Te性（圖2.2），陽性菌液測序結(jié)果顯示，其中三個位點的堿基發(fā)生突變，一 151 位氨基酸由 L 變?yōu)?P，第 323 ，氨基酸序列有 99%同源性。

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]雞球蟲病活疫苗的研究進展[J]. 李玉劍,岳城,董輝,黃兵.  中國動物傳染病學報. 2009(01)
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博士論文
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碩士論文
[1]柔嫩艾美耳球蟲真核翻譯起始因子3d（eIF3d）基因的研究[D]. 孔春林.上海師范大學 2012
[2]五種雞堆型艾美耳球蟲DNA疫苗免疫保護效果比較[D]. 周婷婷.南京農(nóng)業(yè)大學 2008
[3]四種雞柔嫩艾美耳球蟲免疫調(diào)節(jié)型DNA疫苗免疫保護效果比較[D]. 李俊.南京農(nóng)業(yè)大學 2006
[4]雞柔嫩艾美耳球蟲（E.tenella）DNA疫苗pEtK2-IL-2免疫程序、交叉免疫及穩(wěn)定性研究[D]. 張步彩.南京農(nóng)業(yè)大學 2006



本文編號：3242941