本研究開展了兩個方面的研究,（1）在483頭荷斯坦奶牛中,對我們實驗室前期研究從SNP芯片中篩選出的PTHRP, TGFB1, PTK2, MAF1和PHF20的與奶牛生產(chǎn)性能相關(guān)的SNPs進行了其變異遺傳效應的驗證,以獲得繁殖和產(chǎn)奶性能相關(guān)的分子遺傳標記。（2）建立鋅缺乏癥（Bovine hereditary zinc deficiency, BHZD）、脊髓型肌萎縮癥（Spinal muscular atrophy, SMA）、血友�。℉emophilia A）以及軸突病變（Degenerative Axonopathy）四種疾病的致病基因突變位點的分子生物學檢測技術(shù),并利用測序技術(shù)對其準確性進行驗證,且對現(xiàn)有的荷斯坦奶牛樣本進行檢測,以淘汰奶牛群中的遺傳病有害基因。主要研究結(jié)果如下：1、PTHRP基因變異對奶牛產(chǎn)奶繁殖性能具有顯著的影響。在PTHRP基因intron1中的SNP位點（C→T突變）,對第二胎次的305產(chǎn)奶量、總產(chǎn)奶量、總蛋白量均有顯著影響（P<0.05）, CC基因型個體的高于其他二個基因型個體的；對第一胎和第三胎的犢牛出生重量均達到了顯著水平（P<0.... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 基因變異對奶牛繁殖產(chǎn)奶性狀影響的分析
    第一章 文獻綜述
        1.1 引言
        1.2 候選基因研究進展
            1.2.1 甲狀旁腺素相關(guān)蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHRP)基因
            1.2.2 TGFB1(轉(zhuǎn)化生長因子-β1)基因
            1.2.3 PTK2(粘著斑激酶)基因
            1.2.4 MAF1(同源釀酒酵母)基因
            1.2.5 PHF20(指蛋白20)基因
        1.3 研究目的和意義
    第二章 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 實驗牛
            2.1.2 血液樣品的采集和提取方法
        2.2 主要儀器與設備
        2.3 主要的試劑及配制
            2.3.1 主要試劑的配制
            2.3.2 其他試劑
        2.4 試驗方法
            2.4.1 基因組DNA的提取
            2.4.2 聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)
            2.4.3 SNPs的檢測
            2.4.4 PCR產(chǎn)物酶切及電泳
            2.4.5 分子生物學軟件和數(shù)據(jù)分析軟件
            2.4.6 群體遺傳學研究和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    第三章 結(jié)果與分析
        3.1 PTHRP基因
            3.1.1 牛的PTHRP基因目的片段擴增結(jié)果
            3.1.2 PTHRP基因的基因多態(tài)性檢測
            3.1.3 牛PTHRP基因SNP位點的PCR-RFLP多態(tài)性檢測結(jié)果
            3.1.4 奶牛PTHRP基因的變異特征
            3.1.5 PTHRP基因型與荷斯坦奶牛生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析
        3.2 PTK2基因
            3.2.1 牛的PTK2基因目的片段擴增結(jié)果
            3.2.2 牛PTK2基因SNP位點的CRS-PCR-RFLP多態(tài)性檢測結(jié)果
            3.2.3 奶牛PTK2基因的變異特征
            3.2.4 PTK2基因型與荷斯坦奶牛生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析
        3.3 MAF1基因
            3.3.1 牛的MAF1基因目的片段擴增結(jié)果
            3.3.2 牛MAF1基因SNP位點的PCR-RFLP多態(tài)性檢測結(jié)果
            3.3.3 奶牛MAF1基因的變異特征
            3.3.4 MAF1基因型與荷斯坦奶牛生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析
        3.4 PHF20基因
            3.4.1 牛的PHF20基因目的片段擴增結(jié)果
            3.4.2 牛PHF20基因SNP位點的PCR-RFLP多態(tài)性檢測結(jié)果
            3.4.3 奶牛PHF20基因的變異特征
            3.4.4 PHF20基因型與荷斯坦奶牛生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析
        3.5 TGFB1基因
            3.5.1 牛的TGFBl基因目的片段擴增結(jié)果
            3.5.2 TGFB1基因的基因變異位點的發(fā)現(xiàn)
    第四章 討論
        4.1 PTHRP基因內(nèi)含子變異對奶牛產(chǎn)奶性能影響的討論
        4.2 MAF1、PTK2和PHF20基因變異對奶牛繁殖和產(chǎn)奶性狀產(chǎn)生遺效應的驗證及其討論
            4.2.1 PTK2基因多態(tài)性和性狀關(guān)聯(lián)分析
            4.2.2 MAF1基因多態(tài)性和性狀關(guān)聯(lián)分析
            4.2.3 PHF20基因多態(tài)性和性狀關(guān)聯(lián)分析
第二部分 隱性遺傳疾病致病位點檢測技術(shù)的建立
    第一章 文獻綜述
        1.1 引言
        1.2 脊髓型肌萎縮癥(Spinal muscular atrophy,SMA)的研究進展
            1.2.2 SMA的檢測方法與分布
        1.3 牛鋅缺乏癥(bovine hereditary zinc deficiency,BHZD)的研究進展
            1.3.1 牛鋅缺乏癥(bovine hereditary zinc deficiency,BHZD)的發(fā)病機制及臨床癥狀
            1.3.2 BHZD的檢測方法與分布
        1.4 血友病(hemophilia A)的研究進展
            1.4.1 血友病(hemophilia A)的發(fā)病機制與臨床癥狀
            1.4.2 血友病(hemophilia A)的檢測方法和分布
        1.5 軸突病變(Degenerative Axonopathy)的研究進展
            1.5.1 軸突病變(Degenerative Axonopathy)的發(fā)病機制及臨床癥狀
            1.5.2 軸突病變(Degenerative Axonopathy)的檢測方法和分布
        1.6 研究目的和意義
    第二章 材料與方法
        2.1 試驗材料
            2.1.1 試驗牛來源
            2.1.2 血液樣品的采集和提取方法(見第一部分的材料與方法)
        2.2 主要儀器與設備(見第一部分的材料與方法)
        2.3 主要的試劑及配制(見第一部分的材料與方法)
        2.4 試驗方法
            2.4.1 基因組DNA的提取(見第一部分的材料與方法)
            2.4.2 聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)
            2.4.3 PCR產(chǎn)物酶切及電泳(見第一部分的材料與方法)
            2.4.4 PCR產(chǎn)物回收及測序
    第三章 結(jié)果與分析
        3.1 牛鋅缺乏癥(BHZD)致病位點檢測技術(shù)的建立
            3.1.1 BHZD致病位點PCR-RFLP(BtsC Ⅰ)檢測技術(shù)的建立
            3.1.2 利用序列測序技術(shù)對BHZD致病位點檢測技術(shù)進行驗證
            3.1.3 PCR-RFLP致病位點檢測技術(shù)在荷斯坦奶牛上的應用
        3.2 牛脊髓型肌萎縮癥(SMA)致病位點檢測技術(shù)的建立
            3.2.1 SMA致病位點PCR-RFLP(Mva Ⅰ)檢測技術(shù)的建立
            3.2.2 利用序列測序技術(shù)對SMA致病位點檢測技術(shù)進行驗證
            3.2.3 PCR-RFLP致病位點檢測技術(shù)在荷斯坦奶牛上的應用
        3.3 牛血友病(Hemophilia A)致病位點檢測技術(shù)的建立
            3.3.1 血友病致病位點PCR-RFLP(Ear Ⅰ)檢測技術(shù)的建立
            3.3.2 利用序列測序技術(shù)對Hemophilia A致病位點檢測技術(shù)進行驗證
            3.3.3 PCR-RFLP致病位點檢測方法在荷斯坦奶牛上的應用
        3.4 牛軸突病變(Degenerative Axonopathy)致病位點檢測技術(shù)的建立
            3.4.1 軸突病變致病位點PCR-RFLP(TspR Ⅰ)檢測技術(shù)的建立
            3.4.2 利用序列測序技術(shù)對軸突病變致病位點檢測技術(shù)進行驗證
            3.4.3 PCR-RFLP致病位點檢測技術(shù)在荷斯坦奶牛上的應用
    第四章 討論
        4.1 關(guān)于建立SMA、BHZD、Hemophilia A以及Degenerative Axonopathy四種隱性遺傳疾病致病位點的PCR-RFLP檢測技術(shù)
        4.2 荷斯坦奶牛隱性遺傳疾病的檢測
第三部分 小結(jié)
    1.1 主要結(jié)論
    1.2 本研究創(chuàng)新點
    1.3 本研究的進一步研究內(nèi)容
參考文獻
致謝



本文編號：3241686