毛乳頭細(xì)胞被稱為毛囊發(fā)育周期的調(diào)控中心,多種信號通路參與調(diào)控毛乳頭細(xì)胞的增殖,進(jìn)而影響了毛囊的生長和發(fā)育。山羊皮膚毛囊具有兩種類型,分別為初級毛囊和次級毛囊。初級毛囊可以產(chǎn)毛,次級毛囊可以產(chǎn)絨。本實(shí)驗(yàn)以阿爾巴斯絨山羊初級毛乳頭細(xì)胞和次級毛乳頭細(xì)胞作為細(xì)胞模型,構(gòu)建了Dlx3基因過表達(dá)細(xì)胞系和Dlx3基因干擾細(xì)胞系,目的是研究Dlx3基因?qū)γ轭^細(xì)胞增殖能力的影響,為今后研究毛囊生長發(fā)育中相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1、阿爾巴斯絨山羊初級毛乳頭和次級毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定采用含有15%FBS的DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞,成功培養(yǎng)了阿爾巴斯絨山羊初級毛乳頭細(xì)胞和次級毛乳頭細(xì)胞。選擇ɑ-SMA和CD144標(biāo)志蛋白分子對培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行熒光免疫化學(xué)檢測,結(jié)果表明,90%以上的細(xì)胞均表現(xiàn)出ɑ-SMA和CD144標(biāo)志蛋白的陽性表達(dá),說明培養(yǎng)的細(xì)胞即為真皮毛乳頭細(xì)胞,可以用于下游相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。2、過表達(dá)載體和干擾載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染通過基因片段克隆、酶切、連接和轉(zhuǎn)化等方法,成功構(gòu)建了兩種載體,分別是Dlx3基因過表達(dá)載體和Dlx3基因干擾載體。采用電轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)染方法,將Dlx3基因過表達(dá)載體和干擾載體的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

毛囊的結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1.2Wnt 信號通路示意圖[27]Fig.1.2 The diagram of Wnt classical pathnt/β -catenin 信號通路典的 Wnt/β -catenin 信號通路是目前被研究相對較多的一條信號通路，所以可以條信號通路中研究最清楚的一條信號通路[28]。在許多前期研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)于腫瘤機(jī)理及一些多細(xì)胞生物生長發(fā)育過程，Wnt/β -catenin信號通路起到重要的調(diào)節(jié)作信號通路中一些元件的缺失會對最后的表型產(chǎn)生影響。一部分研究發(fā)現(xiàn) Wnt 信細(xì)胞的激活與分化有影響，另一部分研究則發(fā)現(xiàn) Wnt 信號通路不僅對細(xì)胞的增同時(shí)對組織擴(kuò)張也有一定的調(diào)節(jié)作用。有絲分裂的分化過程中，Wnt 信號通路也起到很重要的調(diào)控作用。并且，Wnt具有時(shí)序性，在同一器官的不同生長發(fā)育階段發(fā)揮的作用也不同。Wnt 信號通正調(diào)控，同時(shí)也具有負(fù)調(diào)控。正調(diào)控有β -catenin、Lef1/Tcf3、LRP、FZD 等[29,30

圖 1.3Notch 信號通路示意圖[38]Fig.1.3The diagram of Notch classical path3 SHH 信號通路SHH（Sonic Hedgehog）,有形態(tài)發(fā)生素的作用，其主要作用是調(diào)控祖細(xì)胞和多潛能干胞的增殖與分化，存在于皮膚和肢體以及骨中。在哺乳動物的 hedgehog 家族主要包括三分泌型蛋白，分別是：indian hedgehog、desert hedgehog 和 hedgehog。Hedgehog 蛋白具調(diào)控胚胎發(fā)育期的圖示形成和細(xì)胞分化的重要作用[39]。在此過程中，Patched1 可以抑制o 蛋白的活性，它是一種十二次跨膜的蛋白，并且它可以作為 SHH 信號通路中的拮抗劑。h 會抑制 Patched1 產(chǎn)生，因此 Smo 蛋白就可以產(chǎn)生，Smo 蛋白可以激活 Gli 轉(zhuǎn)錄因子，要作用是持續(xù)的激活信號通路中的靶基因。Gli 基因因?yàn)闀r(shí)間和位置的不同，具有不同的達(dá)模式，因此會對組織的發(fā)育有不同的影響[40]。在 SHH 信號通路中，通過對 Gli 轉(zhuǎn)錄因

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3238660