干擾素具有廣譜的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)活性,在機(jī)體抵抗外源病毒性病原的感染中發(fā)揮著重要作用。目前己有天然干擾素、原核或真核表達(dá)的重組干擾素應(yīng)用于臨床上病毒性疾病的治療。豬重組干擾素使用大腸桿菌進(jìn)行可溶性表達(dá),所表達(dá)的干擾素具有廣譜的抗病毒活性,在多種動(dòng)物源性的細(xì)胞上顯示出良好的抗病毒能力。本實(shí)驗(yàn)分別使用細(xì)胞和動(dòng)物感染模型測(cè)試重組干擾素對(duì)豬傳染性胃腸炎的療效,取得了以下進(jìn)展：1將實(shí)驗(yàn)室保存的TGEV SC-T株進(jìn)行鑒定,然后使用純凈的TGEV SC-T株感染PK15細(xì)胞作為細(xì)胞感染模型測(cè)試重組干擾素對(duì)TGEV的抑制作用。結(jié)果顯示效價(jià)約2×104IU的干擾素樣品經(jīng)倍比稀釋后處理PK15細(xì)胞,并使用TGEV感染細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)在32倍稀釋時(shí)能夠完全抑制TGEV所致的細(xì)胞病變,與人干擾素標(biāo)準(zhǔn)品顯示出一致的抗病毒能力。通過嗜斑實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)重組干擾素在32倍稀釋時(shí)能夠完全抑制TGEV病毒嗜斑的形成,在64倍稀釋時(shí)能夠顯著抑制TGEV病毒嗜斑的形成。另外使用半定量RT-PCR和Wectern-Blot分別檢測(cè)預(yù)處理細(xì)胞感染TGEV后病毒核酸和蛋白的表達(dá)情況,結(jié)果顯示重組干擾素能夠顯著抑制病毒基因組的復(fù)制和TGEV特... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞
中文摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 豬干擾素α研究進(jìn)展
        1.1 豬干擾素α的發(fā)現(xiàn)
        1.2 豬干擾素α的分類
        1.3 豬干擾素α的作用機(jī)理
            1.3.1 IFN-α發(fā)揮作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
            1.3.2 IFN-α抗病毒作用
            1.3.3 IFN-α免疫調(diào)節(jié)
            1.3.4 IFN-α抗腫瘤
        1.4 豬干擾素α與病毒感染
        1.5 豬干擾素α的抗病毒研究
            1.5.1 抗偽狂犬病毒的研究
            1.5.2 抗豬傳染性胃腸炎病毒的研究
            1.5.3 抗豬繁殖與呼吸綜合征病毒的研究
            1.5.4 抗口蹄疫病毒的研究
    2 豬傳染性胃腸炎研究進(jìn)展
        2.1 TGEV病原學(xué)
        2.2 TGEV感染的臨床癥狀
        2.3 TGEV的防治
    3 本研究的目的和意義
第二章 豬干擾素體外抗TGEV的研究
    1 材料與方法
        1.1 細(xì)胞、菌株及病毒株
        1.2 藥品
        1.3 試劑
        1.4 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑
        1.5 引物
        1.6 病毒增殖
        1.7 病毒株的鑒定
            1.7.1 RT-PCR、基因克隆及測(cè)序
            1.7.2 純凈性檢測(cè)
            1.7.3 理化鑒定
        1.8 病毒毒力測(cè)定
        1.9 rPoIFN-α體外抗豬傳染性胃腸炎病毒試驗(yàn)
        1.10 rPoIFN-α體外抑制豬傳染性胃腸炎病毒增值動(dòng)力學(xué)檢測(cè)
            1.10.1 空斑形成試驗(yàn)檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒量
            1.10.2 rPoIFN-α對(duì)TGEV滴度的影響
            1.10.3 半定量RT-PCR檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒基因表達(dá)
            1.10.4 Western-blot檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒蛋白表達(dá)
    2 結(jié)果
        2.1 病毒增殖
        2.2 RT-PCR鑒定及測(cè)序結(jié)果
        2.3 純凈性檢測(cè)結(jié)果
            2.3.1 細(xì)菌檢測(cè)結(jié)果
        2.4 病毒理化試驗(yàn)
        2.5 病毒毒力測(cè)定
        2.6 三批次rPoIFN-α誘導(dǎo)PK-15細(xì)胞抗豬傳染性胃腸炎病毒效果
        2.7 三批次rPoIFN-α體外抗豬傳染性胃腸炎病毒試驗(yàn)病毒增殖動(dòng)力學(xué)檢測(cè)
            2.7.1 空斑形成試驗(yàn)檢測(cè)病毒量變化結(jié)果
            2.7.2 rPoIFN-α對(duì)TGEV滴度的影響
            2.7.3 半定量RT-PCR檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒基因表達(dá)結(jié)果
            2.7.4 Western-blot檢測(cè)豬傳染性胃腸炎病毒蛋白表達(dá)結(jié)果
    3 討論
第三章 重組干擾素在仔豬體內(nèi)抑制TGEV的研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞及病毒
        1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.3 藥品及試劑
        1.4 儀器設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 仔豬人工感染豬傳染性胃腸炎病毒感染模型的建立
            2.1.1 攻毒所用病毒液的制備
            2.1.2 動(dòng)物接種
            2.1.3 臨床癥狀的觀察
            2.1.4 病料組織的RT-PCR檢測(cè)
            2.1.5 病料組織病毒分離
            2.1.6 病理組織學(xué)觀察
        2.2 三批次重組豬干擾素α在仔豬體內(nèi)抑制豬傳染性胃腸炎病毒的研究
            2.2.1 重組豬干擾素α對(duì)豬傳染性胃腸炎的最適治療劑量篩選
                2.2.1.3 病理學(xué)檢測(cè)
            2.2.2 重組豬干擾素α實(shí)驗(yàn)室最適治療時(shí)間研究
            2.2.3 三批次干擾素治療結(jié)果檢測(cè)
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 仔豬人工感染豬傳染性胃腸炎病毒的建立
            3.1.1 臨床特征和剖檢觀察
            3.1.2 病料組織RT-PCR檢測(cè)
            3.1.3 病料組織病毒分離結(jié)果
            3.1.4 病理組織學(xué)變化觀察
        3.2 重組豬干擾素α對(duì)豬傳染性胃腸炎的治療劑量篩選
            3.2.2 RT-PCR檢測(cè)
        3.3 重組豬干擾素α實(shí)驗(yàn)室最適治療時(shí)間研究
            3.3.1 臨床癥狀分析
            3.3.2 RT-PCR檢測(cè)
            3.3.3 病理染色檢測(cè)
        3.4 三批次重組豬干擾素a對(duì)仔豬感染豬傳染性胃腸炎實(shí)驗(yàn)室治療
            3.4.1 治療后臨床癥狀觀察
            3.4.2 RT-PCR結(jié)果
            3.4.3 病理組織學(xué)變化觀察
    4 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]干擾素-τ的研究進(jìn)展[J]. 付加雷,宋長(zhǎng)征.  藥物生物技術(shù). 2006(01)
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[6]干擾素-τ對(duì)綿羊妊娠識(shí)別影響的研究進(jìn)展[J]. 姜懷志,李雪,馬寧.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2005(03)
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本文編號(hào)：3237777