鈣敏感受體（CaSR）是機體重要的鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)劑。它主要是通過控制血液中甲狀旁腺相關(guān)肽（PTHrP）的水平，來控制血鈣濃度。同時，它也可以通過調(diào)節(jié)質(zhì)膜鈣ATP酶（PMCA2）的活性控制細胞泵出鈣的量，來維持細胞內(nèi)的鈣濃度。PTHrP的作用主要是促進鈣離子向血液的運輸以維持血鈣水平；PMCA2的主要功能就是負責將乳腺上皮細胞內(nèi)的鈣離子轉(zhuǎn)運到細胞外（乳汁中）；△FosB的主要生理作用是參與骨鈣的沉積與骨鈣轉(zhuǎn)化；MMP-9在乳腺組織中主要參與組織重塑和細胞遷移，與乳汁的體細胞數(shù)和乳品質(zhì)關(guān)系很大。目前CaSR與上述乳腺中重要的鈣代謝基因PMCA2、△FosB、MMP-9的關(guān)系尚不清楚。另外，關(guān)于CaSR對山羊乳腺上皮細胞（GMECs）凋亡的影響尚未見報道。因此本研究對CaSR基因進行了克隆，并對該基因與ΔFosB、PMCA2、PTHrP和MMP-9基因的關(guān)系和對乳腺上皮細胞凋亡的影響進行了研究，為進一步揭示乳腺上皮細胞鈣代謝的調(diào)控機制積累資料。獲得試驗結(jié)果如下：1)克隆了CaSR CDs區(qū)，共3531bp（Genbank登錄號為KF006348）；該基因位于山羊1號染色體上；序列編碼1085個氨... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

哺乳期間，乳腺上皮細胞的CaSR可以通過影響PMCA2和PTHrP的活性增加乳汁中鈣離子轉(zhuǎn)運量（VanHoutenandWysolmerski2013）

2.2.7 序列分析使用 Vector NTI 11.0 軟件對山羊 CaSR 基因測序結(jié)果進行比對和拼接分析；利用ORF-finder（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/gorf/）預測 cDNA 的編碼區(qū)；BLAST程序（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast）比較序列同源性；利用在線工具 Expert ProteinAnalysis System（http://www.bioinformatics.org/sms/）整理核酸與氨基酸序列；用 SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/）和 Pfam 數(shù)據(jù)庫（http://pfam.sanger.ac.uk/search）預測蛋 白 結(jié) 構(gòu) 域 ； 利 用 CBS （ http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/ ） 和 MitoProt（http://ihg.gsf.de/ihg/mitoprot.html）進行蛋白亞細胞定位分析。2.3 結(jié)果與分析2.3.1 山羊 CaSR 基因 cDNA 片段的克隆以山羊乳腺組織總 RNA（圖 2-1A）反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，分別用 F1-R1、F2-R2、F3-R3為引物 PCR 擴增 CaSR 基因的 cDNA 片段，用 1%瓊脂糖凝膠電泳檢測（圖 2-1B）。

2881 CGCCAGCGGTCCAGCAGCCTGGGGGGCTCCACGGGATCCACCCCCTCCTCCTCCATCAGCAGCAAGAGCAACAGCGAGGACCCCTTCCCG927 Q Q Q P E R Q K Q P Q P L A L S P H N A Q Q P Q P R P P S T2971 CAGCAGCAGCCGGAGAGGCAGAAGCAGCCACAGCCGCTGGCCCTGAGCCCGCACAACGCGCAGCAGCCGCAGCCGCGGCCACCCTCGACC957 P Q P Q P Q S Q Q P P R C K Q K V I F G S G T V T F S L S F3061 CCACAGCCGCAGCCACAGTCGCAGCAGCCGCCCCGATGCAAGCAGAAGGTCATCTTCGGCAGCGGCACCGTCACCTTCTCGCTGAGCTTT987 D E P Q K S A V A H R N S T H Q T S L E A Q K N N D A L T K3151 GACGAGCCTCAGAAGAGCGCCGTGGCTCACAGGAATTCCACGCACCAGACCTCCCTGGAGGCCCAGAAAAACAATGACGCCCTGACCAAA1017 H Q A L L P L Q C G E T D S E L T A Q E T G L Q G P V S E D3241 CACCAGGCGTTGCTCCCGCTGCAGTGCGGGGAGACGGACTCGGAACTGACCGCCCAGGAGACAGGCCTGCAGGGCCCTGTGAGTGAGGAC1047 H Q L E M E D P E E M S P A L V V S N S R S F V I S G G G S3331 CACCAGCTAGAGATGGAGGACCCCGAAGAGATGTCCCCAGCACTTGTAGTGTCTAATTCCCGGAGCTTTGTCATCAGCGGTGGAGGCAGC1077 T V T E N M L R S *3421 ACTGTTACAGAAAACATGCTGCGTTCTTAAAAGGGAAGGAGAAAGCCAGCTCAGGGAGAATCCAGGCAGTTTTCCCGGGATGACCTTCTC3511 CAAAGGGATGAGGAACTGCCC圖 2-2 山羊 CaSR 基因 CDS 區(qū)全序列Fig.2-2. Nucleotide, deduced amino acid sequence and the predicted protein domains of goat CaSR.2.3.3 氨基酸序列的理化性質(zhì)和磷酸化位點通過理化性質(zhì)分析，氨基酸分子量為 121013.9Da，分子式是 C5446H8372N1432O1596S49，等電點是 5.65。（表 2-1）。通過磷酸化位點分析，18 個 Ser、6 個 Tyr 和 9 個 Thr 可能的蛋白激酶磷酸化位點（圖 2-3）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Plasma membrane calcium pumps and their emerging roles in cancer[J]. Sarah J Roberts-Thomson,Merril C Curry,Gregory R Monteith.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(08)
[2]動物細胞外鈣敏感受體研究進展[J]. 鄧光存,喬健.  中國獸醫(yī)雜志. 2008(10)



本文編號：3236791