旋毛蟲病（Trichinosis）是由旋毛蟲（Trichinella spiralis）引起的一種危害嚴重的人獸共患寄生蟲病,是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定的B類疫病。能量代謝是所有生物的生存基礎(chǔ),而對于許多寄生蟲來說,糖酵解是其產(chǎn)生能量的主要途徑。近些年的研究發(fā)現(xiàn),在糖酵解途徑中起重要作用的酶類在寄生蟲的免疫調(diào)節(jié)和免疫逃避中發(fā)揮著重要作用,因此可以作為潛在的疫苗候選分子。醛縮酶（aldolase）、烯醇化酶（enolase）和己糖激酶（hexokinase）是糖酵解途徑中的3個關(guān)鍵酶,不僅在寄生蟲的能量代謝中具有重要作用,也對寄生蟲的入侵和免疫逃避提供幫助。為了探尋旋毛蟲體內(nèi)的糖酵解酶類能否對宿主起到免疫保護作用,進行了如下工作：1.旋毛蟲醛縮酶（Tsald）、烯醇化酶（Tseno）和己糖激酶2（Tshk2）基因的克隆根據(jù)GenBank中發(fā)表的旋毛蟲Tsald基因序列（XM₀03374234）、Tseno基因序列（AF363629.1）和Tshk2基因序列（XM₀03371674.1）分別設(shè)計引物。以旋毛蟲肌幼蟲總RNA為模板,用RT-P... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１旋毛蟲成蟲（ａ雌蟲，ｂ雄蟲）（引白Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??Ｆｉ１－１?ａ．Ａｄｕｌｔ?ｆｅｍａｌｅ?Ｔ．?ｓｉｒａｌｉｓｂ，Ａｄｕｌｔ?ｍａｌｅ?Ｔ，?ｓｉｒａｌｉｓ?（?Ｆｒｏｍ?Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??

ａ?ｂ??圖１－１旋毛蟲成蟲（ａ雌蟲，ｂ雄蟲）（引白Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??Ｆｉｇ?１－１?ａ．?Ａｄｕｌｔ?ｆｅｍａｌｅ?Ｔ．?ｓｐｉｒａｌｉｓ；?ｂ，?Ａｄｕｌｔ?ｍａｌｅ?Ｔ，?ｓｐｉｒａｌｉｓ?（?Ｆｒｏｍ?Ｖｉｌｌｅｌｌａ）??１．３旋毛蟲生活史??旋毛蟲的生活史見圖１－２。當(dāng)人或動物生食或半生食了含有肌幼蟲時期旋毛蟲的??肉類后，在胃液中胃酸和消化酶的作用下，幼蟲從被消化了的肉中釋放出來，侵入小??腸上Ｈ分之二段的化狀上皮細胞中［７－８１，并在約３０個小時的時間內(nèi)通過４次賊皮發(fā)育??成成蟲并開始進行交配。成年雌蟲在交配后的第４天開始產(chǎn)出新生幼蟲。一條雌蟲一??生最多能夠產(chǎn)出近２０００條新塵幼蟲。在這個過程中，只要宿主的免疫系統(tǒng)沒有察覺??到雌蟲便可＾文一直產(chǎn)蟲。當(dāng)宿主的免疫應(yīng)答發(fā)揮作用時，便通過免疫反應(yīng)干擾雌蟲體??內(nèi)蟲卵的臟胎發(fā)育并通過一系列塵理反應(yīng)將成蟲排出腸外，這一過程持續(xù)約數(shù)周。新??化幼蟲具有像利劍般的口錐，能借此來穿透進入淋己或血液循環(huán)中并進入全身各處器??２??

現(xiàn)在人們已將兩類醒縮酶的催化機理研究清楚，發(fā)現(xiàn)它們分別有著各自的催化方??式［＾１］。第一型酸縮酶利用一個具有活性的賴氨酸殘基激活底物（果糖＿１，６＿二稱酸）??并與之形成Ｓｃｈｉｆ堿中間體從而實現(xiàn)底物麗的活化（圖３－２）。Ｓ沈ｉｆ堿隨后Ｗ稀胺的形??式使得底物４號位碳上的超基去質(zhì)子化，生成Ｇ３Ｐ和ＤＨＡＰ。其中一型醒縮酶催化位??點上賴氨酸與中間體形成穩(wěn)定的共價鍵來推動反應(yīng)的進行，此外，還發(fā)現(xiàn)在其駿基端??３４１？３６３位膚段對該酶的催化活性有明顯的調(diào)節(jié)作用，這可能與其同工酶在Ｃ－末端區(qū)??域周圍都有獨特的二級結(jié)構(gòu)有關(guān)。??相比之下，二型酵縮酶通過一種二價金屬離子（如巧離子、鎊離子）與底物上二??碳位的艱基和Ｈ碳位的徑基形成配位鍵，繼而通過Ｈ號位碳和四號位碳的裂解形成較??為穩(wěn)定的五碳嬌二醇化物中間體（圖３－２）。目前對二型酸縮酶研究的較為透徹的是從??大腸桿菌中獲得的醇縮酶（ｅｃＦＰＡ）。二型醒縮酶具有（有二型醇縮酶筒狀折疊結(jié)構(gòu)，??能夠?qū)⒋嬖谟冢茫┒送矤罱Y(jié)構(gòu)上的催化位點催化金屬離子與底物上二碳位的幾基和??Ｈ碳位的駿基形成味啤結(jié)構(gòu)，而起催化作用的是催化位點上位于１１０

【參考文獻】：
期刊論文
[1]旋毛蟲p43與p53核酸疫苗的構(gòu)建及其免疫保護性[J]. 龐宇,李巍,韓彩霞,伊娜娜,劉暢,俞昭旸,宋銘忻.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2013(03)
[2]1964-2011年中國大陸人體旋毛蟲病流行分析[J]. 鄭德福,肖寧,馮萍,許光榮,歐陽清,廖琳,葉萍,陳漪瀾.  寄生蟲病與感染性疾病. 2011(03)
[3]日本血吸蟲亮氨酸氨基肽酶和果糖二磷酸醛縮酶重組疫苗對小鼠的保護性免疫效果觀察[J]. 劉萍,沈繼龍,鐘政榮,羅慶禮.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2010(06)
[4]旋毛蟲TsP53重組蛋白對小鼠的免疫保護性[J]. 王鴻盛,李文卉,蓋文燕,姚菊霞,曲自剛,王艷華,張德林,薛慧文,付寶權(quán).  中國獸醫(yī)科學(xué). 2010(10)
[5]血吸蟲病DNA疫苗免疫研究進展[J]. 朱占勝,吳明燦,陳世潔,王鵬,趙光銳.  中國公共衛(wèi)生. 2010(09)
[6]旋毛蟲Ts21重組蛋白的免疫診斷價值及免疫保護作用的研究[J]. 王睿,王中全,崔晶.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2009(01)
[7]體內(nèi)電穿孔增強日本血吸蟲核酸疫苗免疫保護作用的研究[J]. 戴洋,朱蔭昌,唐建霞,王曉婷,魯飛,章輝,徐明,許永良,管曉虹.  中國血吸蟲病防治雜志. 2008(03)
[8]α烯醇化酶——古老的蛋白,嶄新的功能[J]. 朱理安,方寧遠.  國際病理科學(xué)與臨床雜志. 2007(04)
[9]我國旋毛蟲病的流行趨勢及防治對策[J]. 崔晶,王中全.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2005(S1)
[10]國外旋毛蟲病的流行現(xiàn)狀[J]. 崔晶,王中全.  國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊). 2005(05)

博士論文
[1]旋毛蟲49ku ES抗原基因核酸疫苗構(gòu)建及免疫保護作用研究[D]. 路義鑫.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]日本血吸蟲重組烯醇化酶研究[D]. 邱春輝.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



本文編號：3235319