發(fā)布時間：2021-06-17 03:17

　　羊痘俗稱羊“天花”，是由綿羊痘病毒或山羊痘病毒引起山羊或綿羊的一種高度接觸性傳染病。該病主要在亞洲、非洲和中東地區(qū)流行，我國多個省市尤其是西北地區(qū)都有爆發(fā)，嚴重影響了養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。羊痘病毒屬為線性雙鏈DNA病毒，基因組大小約為150kbp。ORF95和ORF103均編碼病毒粒子的核心蛋白，在病毒粒子裝配中發(fā)揮重要作用。研究表明，兩種蛋白均可與山羊痘和綿羊痘陽性血清發(fā)生反應(yīng)，可作為該病診斷的候選抗原。隨著羊痘流行范圍日漸廣泛，亟需建立一種高效、快速、靈敏、穩(wěn)定的診斷方法以便于防控工作的開展。鑒于此，本研究進行了以下幾方面的工作：1. ORF095與ORF103的克隆與序列分析從山羊痘活疫苗毒株基因組中擴增ORF95與ORF103，并連接至克隆載體pMD-18T。序列分析表明，兩個基因與其它同源基因的相似性均在96.7%¹00%和96.9%¹00%之間。基于兩個ORF的系統(tǒng)發(fā)育進化樹均顯示，本研究中的弱毒疫苗毒株與已登錄的兩個山羊痘病毒毒株構(gòu)成一個分支，并與皮膚疙瘩病病毒構(gòu)成一個大的分支，而綿羊痘病毒毒株構(gòu)成另外一個分支。在線生物信息學軟件預測表... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒pMD-18T-95和pMD-18T-103的PCR鑒定Fig.2-2IdentificationofrecombinantplasmidspMD-18T-95andpMD-18T-103byPCR

2.3.3 ORF95 和 ORF103 的序列分析2.3.3.1 ORF95 基因序列分析重組質(zhì)粒 pMD-18T-95 的測序結(jié)果顯示，山羊痘弱毒疫苗毒的 ORF95 基因大小為 483bp，編碼蛋白由 161 個氨基酸殘基組成。用 DNAStar 軟件包中的 MegAlign 對 ORF95 基因測序結(jié)果與參考序列進行同源性比較。結(jié)果顯示，ORF95 與 GenBank 登錄的羊痘病毒屬基因組(AY077834,AY077833, AY077832, AF409137, AF325528, AY077836, AY077835 和 AF409138)中同源基因的核苷酸一致性均大于 96.9%（圖 2-3）。在線軟件預測分析 ORF95 編碼蛋白特點，結(jié)果顯示，該蛋白的等電點為 8.43，極性氨基酸含量為 38.5%，其中帶負電荷的氨基酸占 18.6%，帶正電荷的氨基酸占 19.9%；二級結(jié)構(gòu)預測結(jié)果顯示，Helix 占 55.28%，Sheet 占 3.73，Loop 占 40.99%。并且該蛋白無信號肽序列和跨膜區(qū)。ORF95 核苷酸水平上的進化樹分析表明，羊痘病毒屬病毒可分為圖 2-2. 重組質(zhì)粒 pMD-18T-95 和 pMD-18T-103 的 PCR 鑒定Fig.2-2 Identification of recombinant plasmids pMD-18T-95 andpMD-18T-103 by PCRM: DNA 分子質(zhì)量標準；1, 2, 3: ORF103; 4, 5, 6: ORF95M: DL2000 plus DNA Maker; 1, 2, 3: ORF103; 4, 5, 6: ORF95圖 2-1. ORF95 和 ORF103 基因的 PCR 擴增Fig.2-1 PCR amplification of ORF95 and ORF103M: DNA 分子質(zhì)量標準；1: ORF103; 2: ORF95M: DL2000 plus DNA Maker; 1: ORF103; 2:ORF95

152.3.3.2 ORF103 基因序列分析重組質(zhì)粒 pMD-18T-103 的測序結(jié)果顯示，山羊痘弱毒疫苗病毒的 ORF103 基因大小為 570bp，編碼蛋白由 190 個氨基酸殘基組成。ORF103 基因與參考序列同源性的比較結(jié)果顯示，ORF103圖 2-5 ORF95 編碼蛋白的抗原性分析Fig. 2-5 Analysis of antigentic index of ORF95-encoding protein圖 2-4 ORF95 基因進化發(fā)育樹的構(gòu)建Fig. 2-4 Phylogenetic analysis of ORF95 of Capripoxvirus


本文編號：3234354