淋巴細(xì)胞活化基因3（Lymphocyte activation gene-3,LAG-3）,在活化的T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞有選擇性表達(dá)。是一種對(duì)T細(xì)胞具有負(fù)調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞表面分子蛋白。LAG-3作為一種可溶性分子,通過MHCⅡ類信號(hào)激活抗原提呈細(xì)胞,導(dǎo)致體內(nèi)抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答增加。最新研究顯示FGL1/LAG-3是新的免疫抑制通路,通過抑制FGL LAG-3通路能夠讓T細(xì)胞重新恢復(fù)細(xì)胞毒性作用,從而限制腫瘤的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)通過定點(diǎn)突變方法,將LAG-3基因經(jīng)過三輪PCR擴(kuò)增得到LAG-3突變基因,將得到的LAG-3突變體基因與載體pCANTAB5E載體連接,將其轉(zhuǎn)化入Ecoli TG1感受態(tài)細(xì)胞,構(gòu)建LAG-3突變體庫(kù)。利用FGL1蛋白包被固相載體,對(duì)LAG-3突變體庫(kù)經(jīng)過三輪的富集,phage ELISA法篩選到16個(gè)陽(yáng)性克隆,選擇其中一個(gè)陽(yáng)性值最高的LAG-3M59進(jìn)行了表達(dá)和鑒定。一:將LAG-3基因和LAG-3突變體基因（LAG-3M59）分別與載體pCANTAB5E連接,將其轉(zhuǎn)化入E.coli TG1感受態(tài)細(xì)胞中,利用輔助噬菌體M13K07包裝后,通過FGL1包被固相載體,采用... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：47 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＰＣＲ—輪擴(kuò)增結(jié)果??

１６?淋巴細(xì)胞活化基因３突變體庫(kù)的制備、篩選及鑒定???２０００ｂｐ—Ｈｍ：＊Ｌ?＇＾ｖ＾?；ｒ?５－１?＇？?＊ｓ?，，?＂?＇ｃｌ：??１０００ｂｐ－Ｂ＾－ｔＳ％?－＾ｉ：?＾?．?：．＾?＾?：＝?￡??７５〇ｂｐ—二．＇…興：；署：??５００ｂｐ—??２５０ｂｐ－??，■■■??圖３?ＰＣＲ二輪擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇ．３?ＰＣＲ?ｔｈｉｒｄ?ｒｏｕｎｄ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??ｌａｎｅＭ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ，?Ｌａｎｅｌ＿４：?ＰＣＲ?二輪擴(kuò)增??以ＰＣＲ—輪擴(kuò)增膠回收產(chǎn)物為模板，使用ＬＡＧＦ和ＬＡＧＲ２為引物，進(jìn)行ＰＣＲ??擴(kuò)增，擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，獲得４１７?ｂｐ左右的目的條帶。結(jié)果如圖３所示。???Ｍ?１?２???２０００ｂｐ—Ｂ??ｌＯＯＯｂｐ—■?ｒ?，??７５０ｂｐ—??５Ｄ０ｂｐ?—??２５０ｂｐ—■、：?Ｈｑ??１００ｂｐ—■巧：：＿＾?馨：：：■?１?’??圖４?ＰＣＲ三輪擴(kuò)增結(jié)果??Ｆｉｇ．４?ＰＣＲ?ｆｏｕｒｔｈ?ｒｏｕｎｄ?ｏｆ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ??ｌａｎｅＭ：?ＤＬ２０００?Ｍａｒｋｅｒ，?Ｌａｎｅｌ－２：?ＰＣＲ?三輪擴(kuò)增??以ＰＣＲ二輪擴(kuò)增膠回收產(chǎn)物為模板，使用ＬＡＧＦ和ＬＡＧＲ３引物，進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)??增，擴(kuò)増后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，獲得４５０?ｂｐ左右的目的條帶。結(jié)果如圖４所示。??２．３．２?ＬＡＧ－３噬菌體突變體庫(kù)菌落鑒定結(jié)果??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４?１５?１６?１７?１８?１９?２０??圖５突變體庫(kù)菌落鑒定??Ｆｉｇ．５?Ｍｕｔａｎｔ?ｌｉｂｒａ

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]淋巴細(xì)胞激活基因-3在頭頸部腫瘤免疫治療的研究進(jìn)展[J]. 朱曉可,陶磊.  中國(guó)眼耳鼻喉科雜志. 2019(06)
[2]諾貝爾獎(jiǎng)里的健康密碼[J]. 芮曉鷗.  中國(guó)金融家. 2018(11)
[3]運(yùn)用抗PD-L1抗體治療晚期癌癥患者的安全性與療效評(píng)價(jià)[J]. 姜孝新,Julie R.Brahmer,Scott S.Tykodi,Laura Q.M.Chow.  腫瘤藥學(xué). 2012(03)

碩士論文
[1]從噬菌體肽庫(kù)中篩選具抗前列腺癌功能的新型FGF8b結(jié)合肽[D]. 王文慧.暨南大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3233387