通過比對新城疫病毒強、弱毒株F基因序列,根據(jù)其在F0裂解位點的差異以及F基因保守序列設計合成NDV-V-probe和NDV-L-probe探針組和NDV-F、NDV-R引物組,以基因Ⅶ型NA-1株和基因Ⅱ型LaSota疫苗株病毒RNA作為定量檢測的標準品,建立檢測方法。對所建立的標準曲線進行分析,相關系數(shù)R2均為0.997,線性關系良好。通過計算變異系數(shù)CV/%分別為0.034%和0.027%,均小于1%,說明穩(wěn)定性良好。對禽類常見病毒IBV、H9亞型AIV檢測未發(fā)現(xiàn)有交叉反應,特異性好、重復性佳。結果表明:成功建立了新城疫病毒強、弱毒雙重熒光定量RT-PCR的檢測方法,實現(xiàn)了從分子水平上快速鑒別強、弱毒力的新城疫病毒,也可快速區(qū)分野毒感染動物和疫苗接種動物,減少不必要的經(jīng)濟損失。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)學報. 2017,37(01)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

圖１目的基因擴增Ｍ．ＤＬ２０００ＤＮＡＭａｒｋｅｒ；泳道１～５．強毒株的擴增目的片段；６～９．弱毒株的擴增目的片

２．３標準曲線的確立按２．２優(yōu)化的反應條件，將標準品１０倍梯度倍比稀釋后，分別得到１．０×１０７～１．０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ的標準品模板，以確立的擴增體系進行反應。根據(jù)擴增曲線，分別以Ｃｔ為Ｙ軸，標準品濃度的對數(shù)值為Ｘ軸繪制標準曲線（圖５、６），線性關系分別為ｙ＝－３．３６ｘ＋４１．８５和ｙ＝－３．４３ｘ＋３８．３５，Ｒ２均為０．９９７。線性關系良好。圖４ＪＯＥ通道引物濃度的優(yōu)化１～４．０．２，０．４，０．６，０．８μｍｏｌ／Ｌ；５．陰性對照圖５ＮＡ－１株ＲＮＡ標準品標準曲線２．４敏感性試驗將ＲＮＡ標準品以１０倍梯度倍比稀釋，分別得到１．０×１０７～１．０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ的標準品；熒光定量ＰＣＲ擴增結果圖見圖７和圖８，最低圖６ＬａＳｏｔａ株ＲＮＡ標準品標準曲線檢測濃度分別為１．０×１０２ｃｏｐｉｅｓ／μＬ和１．０×１０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ。圖７ＦＡＭ通道敏感性試驗１～８．１．０×１０７～１．０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ；９．陰性對照４中國獸醫(yī)學報２０１７年１月第３７卷第１期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＪａｎ．２０１７Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．１

２．３標準曲線的確立按２．２優(yōu)化的反應條件，將標準品１０倍梯度倍比稀釋后，分別得到１．０×１０７～１．０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ的標準品模板，以確立的擴增體系進行反應。根據(jù)擴增曲線，分別以Ｃｔ為Ｙ軸，標準品濃度的對數(shù)值為Ｘ軸繪制標準曲線（圖５、６），線性關系分別為ｙ＝－３．３６ｘ＋４１．８５和ｙ＝－３．４３ｘ＋３８．３５，Ｒ２均為０．９９７。線性關系良好。圖４ＪＯＥ通道引物濃度的優(yōu)化１～４．０．２，０．４，０．６，０．８μｍｏｌ／Ｌ；５．陰性對照圖５ＮＡ－１株ＲＮＡ標準品標準曲線２．４敏感性試驗將ＲＮＡ標準品以１０倍梯度倍比稀釋，分別得到１．０×１０７～１．０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ的標準品；熒光定量ＰＣＲ擴增結果圖見圖７和圖８，最低圖６ＬａＳｏｔａ株ＲＮＡ標準品標準曲線檢測濃度分別為１．０×１０２ｃｏｐｉｅｓ／μＬ和１．０×１０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ。圖７ＦＡＭ通道敏感性試驗１～８．１．０×１０７～１．０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ；９．陰性對照４中國獸醫(yī)學報２０１７年１月第３７卷第１期ＣｈｉｎＪＶｅｔＳｃｉＪａｎ．２０１７Ｖｏｌ．３７Ｎｏ．１

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3232510