為了研究中藥金銀花是否具有抗牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）活性的作用,試驗首先測定了金銀花對牛腎細胞（MDBK細胞）的最佳用藥濃度,用該濃度的金銀花對在細胞內(nèi)和細胞外兩種狀態(tài)的BVDV進行試驗。細胞外試驗中,把BVDV與金銀花在體外混合,作用0,6,12 h后接種MDBK細胞,以研究金銀花在細胞外抗BVDV活性作用。細胞內(nèi)試驗中,將BVDV先接種至MDBK細胞,然后用含金銀花的細胞維持液培養(yǎng)1 h,最后用細胞維持液繼續(xù)培養(yǎng)24,36,48 h,以觀察金銀花對BVDV復(fù)制的影響。采用免疫熒光試驗、病毒半數(shù)組織細胞感染量(TCID₅₀)測定及熒光定量PCR方法,檢測金銀花對BVDV活性和復(fù)制的影響。結(jié)果表明:當(dāng)金銀花濃度為2.5×10^-2 g/mL時,對細胞的毒性最小。因此,用該濃度的金銀花對BVDV在細胞內(nèi)和細胞外兩種狀態(tài)進行試驗。細胞外試驗組免疫熒光試驗結(jié)果顯示,金銀花與BVDV作用0 h,培養(yǎng)72 h后,仍有特異性熒光;而金銀花與BVDV作用6 h和12 h,培養(yǎng)72 h后則無特異性熒光出現(xiàn),表明在細胞外金銀花對BVDV活性起到了良好的抑制作... 

【文章來源】：黑龍江畜牧獸醫(yī). 2020,(14)北大核心

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【部分圖文】：

細胞內(nèi)外BVDV活性抑制試驗TCID50檢測結(jié)果

金銀花與細胞外BVDV直接作用后,接種易感MDBK細胞,免疫熒光試驗結(jié)果表明,BVDV對細胞失去了感染活性。熒光定量PCR試驗結(jié)果表明,BVDV與藥物作用0,6,12 h后感染細胞,試驗組樣品中BVDV mRNA相對含量均極顯著低于病毒對照組(P<0.01),見圖4。藥物對照組與細胞對照組不含BVDV,不做對比。對細胞內(nèi)的BVDV,金銀花作用24 h,試驗組BVDV mRNA相對含量顯著低于病毒對照組(P<0.05),隨著時間的增加,作用36 h和48 h后,試驗組mRNA相對含量極顯著低于病毒對照組(P<0.01),見圖5。藥物對照組與細胞對照組不含BVDV,不做對比。

對細胞內(nèi)的BVDV,金銀花作用24 h,試驗組BVDV mRNA相對含量顯著低于病毒對照組(P<0.05),隨著時間的增加,作用36 h和48 h后,試驗組mRNA相對含量極顯著低于病毒對照組(P<0.01),見圖5。藥物對照組與細胞對照組不含BVDV,不做對比。4 討論


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