為建立高效、快速和準(zhǔn)確檢測布魯氏菌病原的免疫磁珠qPCR方法,本研究根據(jù)GenBank已經(jīng)發(fā)表的布魯氏菌流產(chǎn)株BRS 19 ku外膜蛋白（Omp19）基因組序列來設(shè)計qPCR方法所需要的引物和探針,利用免疫磁珠富集濃縮樣品中少量的布魯氏菌病原,建立了布魯氏菌免疫磁珠qPCR檢測方法。采用qPCR方法對免疫磁珠分離的布魯氏菌的敏感性、特異性、穩(wěn)定性及臨床應(yīng)用進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,免疫磁珠qPCR方法檢測布魯氏菌的最低檢測限為1×10³CFU/mL。該方法可以擴(kuò)增不同種型布魯氏菌,對其他細(xì)菌沒有發(fā)生交叉反應(yīng)。該方法的批內(nèi)和批間的變異系數(shù)均低于10%,具有較高穩(wěn)定性。免疫磁珠qPCR方法與常規(guī)qPCR的符合率為94.74%,具有良好的吻合性。上述結(jié)果表明,本研究建立的免疫磁珠qPCR方法檢測布魯氏菌具有較高的敏感性、特異性和穩(wěn)定性,為布魯氏菌病的準(zhǔn)確診斷檢測和流行病學(xué)調(diào)查提供技術(shù)支撐。 

【文章來源】：中國獸醫(yī)科學(xué). 2020,50(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

布魯氏菌單克隆抗體純化的SDS-PAGE分析

中國獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖2免疫磁珠qPCR方法的特異性檢測Figure2SpecificresultsofimmunomagneticbeadqPCRmethodS1：M5疫苗；S2：A19疫苗；S3：S2疫苗；S4：大腸桿菌；S5：小腸耶爾森氏菌；S6：金黃色葡萄球菌；S7：沙門菌。S1：M5vaccine；S2：A19vaccine；S3：S2vaccine；S4：E.coli；S5：Y.ente-rocolitica；S6：S.aureus；S7：Salmonel.圖3免疫磁珠qPCR方法的敏感性檢測Figure3SensitivitytestofimmunomagneticbeadqPCRmethod圖1布魯氏菌單克隆抗體純化的SDS-PAGE分析Figure1SDS-PAGEanalysisofBrucellamonoclonalanti-bodypurificationM：蛋白分子質(zhì)量Marker；1～2：流穿液；3～5：洗滌液；6～8：純化后布魯氏菌單克隆抗體。M：ProteinmolecularweightMarker；1—2：Flowthroughsolution；3—5：Washingsolution；6—8：PurifiedBrucellamonoclonalantibody.次和3個不同批次的免疫磁珠qPCR方法進(jìn)行重復(fù)性試驗，每份樣品做3次重復(fù)，以評價該方法的重復(fù)性。1.11免疫磁珠qPCR方法的臨床應(yīng)用用建立的免疫磁珠qPCR方法對田間采集95份病原學(xué)樣品（棉拭子）進(jìn)行檢測，與常規(guī)qPCR方法［11］的實驗結(jié)果相比較，按照符合率的計算公式得出的結(jié)果，以評價該方法的臨床應(yīng)用價值。2結(jié)果2.1布魯氏菌單克隆抗體純化選取流穿液樣品、洗滌液樣品和洗脫液樣品進(jìn)行SDS-PAGE鑒定純化效果，其結(jié)果純化后基本上無雜蛋白，布魯氏菌單克隆抗體得到較好的純化（見圖1）。2.2免疫磁珠qPCR方法的特異性檢測免疫磁珠qPCR方法對M5疫苗、A19疫苗和S2疫苗檢測結(jié)果為陽性，說明該方法可用于多

中國獸醫(yī)科學(xué)第50卷圖2免疫磁珠qPCR方法的特異性檢測Figure2SpecificresultsofimmunomagneticbeadqPCRmethodS1：M5疫苗；S2：A19疫苗；S3：S2疫苗；S4：大腸桿菌；S5：小腸耶爾森氏菌；S6：金黃色葡萄球菌；S7：沙門菌。S1：M5vaccine；S2：A19vaccine；S3：S2vaccine；S4：E.coli；S5：Y.ente-rocolitica；S6：S.aureus；S7：Salmonel.圖3免疫磁珠qPCR方法的敏感性檢測Figure3SensitivitytestofimmunomagneticbeadqPCRmethod圖1布魯氏菌單克隆抗體純化的SDS-PAGE分析Figure1SDS-PAGEanalysisofBrucellamonoclonalanti-bodypurificationM：蛋白分子質(zhì)量Marker；1～2：流穿液；3～5：洗滌液；6～8：純化后布魯氏菌單克隆抗體。M：ProteinmolecularweightMarker；1—2：Flowthroughsolution；3—5：Washingsolution；6—8：PurifiedBrucellamonoclonalantibody.次和3個不同批次的免疫磁珠qPCR方法進(jìn)行重復(fù)性試驗，每份樣品做3次重復(fù)，以評價該方法的重復(fù)性。1.11免疫磁珠qPCR方法的臨床應(yīng)用用建立的免疫磁珠qPCR方法對田間采集95份病原學(xué)樣品（棉拭子）進(jìn)行檢測，與常規(guī)qPCR方法［11］的實驗結(jié)果相比較，按照符合率的計算公式得出的結(jié)果，以評價該方法的臨床應(yīng)用價值。2結(jié)果2.1布魯氏菌單克隆抗體純化選取流穿液樣品、洗滌液樣品和洗脫液樣品進(jìn)行SDS-PAGE鑒定純化效果，其結(jié)果純化后基本上無雜蛋白，布魯氏菌單克隆抗體得到較好的純化（見圖1）。2.2免疫磁珠qPCR方法的特異性檢測免疫磁珠qPCR方法對M5疫苗、A19疫苗和S2疫苗檢測結(jié)果為陽性，說明該方法可用于多

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3229296