發(fā)布時(shí)間：2021-06-13 18:56

　　為建立一種鑒定豬急性腹瀉綜合征病毒（SADS-CoV）的RT-PCR方法,根據(jù)NCBI登錄的SADS-CoV N基因保守區(qū)域序列,設(shè)計(jì)了3對引物（P1、P2和P3）,通過對SADS-CoV及其他6種病毒進(jìn)行檢測,篩選出最合適的引物,然后對退火溫度、引物濃度、dNTPs濃度、rTaq DNA聚合酶濃度和循環(huán)次數(shù)等反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果顯示,P3引物對SADS-CoV特異性最好,與其他病毒無交叉反應(yīng)。敏感性試驗(yàn)顯示,該方法最低檢測限可達(dá)9.55×10² copies/μL;重復(fù)性試驗(yàn)顯示該方法重復(fù)性良好。運(yùn)用建立的RT-PCR方法,對廣東省的21份臨床樣品進(jìn)行檢測,結(jié)果檢出SADS-CoV陽性樣品4份,陽性樣品的測序結(jié)果與其RT-PCR完全一致。結(jié)果表明,本研究成功建立了一種鑒定SADS-CoV的RT-PCR方法,且該方法具有檢測快速、成本廉價(jià)、特異性強(qiáng)、敏感性高和重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn),可以用于SADS-CoV的臨床診斷。 

【文章來源】：中國動(dòng)物檢疫. 2020,37(11)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

引物特異性鑒定結(jié)果

退火溫度、引物濃度、r Taq DNA聚合酶和d NTP濃度的優(yōu)化結(jié)果

最佳循環(huán)次數(shù)優(yōu)化結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2018年江西及福建省新現(xiàn)豬急性腹瀉冠狀病毒的分子流行病學(xué)調(diào)查[J]. 張譽(yù)瀚,袁為鋒,張帆帆,李凱,李指全,宋德平,唐玉新.  養(yǎng)豬. 2019(04)
[2]豬傳染性胃腸炎病毒RT-PCR檢測方法的建立及臨床應(yīng)用[J]. 王黎,李碧,周遠(yuǎn)成,朱玲,徐志文,郭萬柱.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(02)



本文編號(hào)：3228128