本試驗旨在探索4℃條件下蛋白的上樣體積、流速和蛋白濃度對豬內(nèi)脂素重組蛋白溶液中內(nèi)毒素的去除效果和蛋白損失量的影響。該研究采用商品化、修飾過的多黏菌素B為介質(zhì),特異性地去除蛋白溶液中的內(nèi)毒素。在4℃條件下,選用不同的上樣體積（6、8、10、12 mL）、流速（0.125～0.75 mL/min）和蛋白濃度（0.9、1.2、1.3、1.7 mg/mL）進行內(nèi)毒素的去除,使用內(nèi)毒素檢測試劑盒定量測定內(nèi)毒素含量,使用BCA蛋白濃度測定試劑盒進行蛋白濃度的測定。試驗結(jié)果表明:在4℃條件下,蛋白上樣體積12 mL、流速0.125～0.25 mL/min時,內(nèi)毒素的去除效果最佳,去除率高達(dá)99.5%,內(nèi)毒素的殘余量（1 EU/mL）在生物安全范圍以內(nèi),并且蛋白的回收率高達(dá)90～95%。試驗結(jié)果證明成功去除豬內(nèi)脂素重組蛋白溶液中的內(nèi)毒素,為該蛋白的相關(guān)功能研究和臨床應(yīng)用提供參考。 

【文章來源】：中國畜牧獸醫(yī). 2020,47(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

內(nèi)毒素檢測試劑標(biāo)準(zhǔn)曲線

內(nèi)毒素去除效果

4 ℃條件下,上樣體積為6～9 mL時,蛋白溶液中的內(nèi)毒素含量增加,而當(dāng)上樣體積超過此范圍時,蛋白溶液中內(nèi)毒素的含量隨著上樣體積的增加呈現(xiàn)下降的趨勢,在達(dá)到層析柱最大容量12 mL時內(nèi)毒素含量最少。上樣體積為6～9 mL時,蛋白的損失量降低,之后隨著上樣體積的增加,蛋白損失量先升高后降低,層析柱最大容量12 mL時蛋白損失率與9 mL時的蛋白損失率相近(圖3、4)。當(dāng)層析柱中的蛋白流干后,加5 mL平衡液洗脫殘留在層析柱上的蛋白,殘留蛋白洗脫率可高達(dá)90%以上。不同上樣體積的蛋白流干后,加相同體積的平衡液洗脫殘留蛋白,上樣體積越大,洗脫后的殘留蛋白的內(nèi)毒素含量越低(圖5、6)。圖4 上樣體積對蛋白損失量的影響

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3222001