為了拯救具有感染性的髓細胞瘤型J亞群禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALV）HB2015029株,本研究以含有ALV-J HB2015029株基因組片段的質(zhì)粒為模板,采用高保真PCR,擴增出3段重疊并含有合適酶切位點病毒基因片段。將獲得的基因組片段分別克隆至pTopo-Blunt Simple載體,經(jīng)過酶切、連接成功構(gòu)建了含有病毒全基因組的質(zhì)粒TOPO-029-ABC。將TOPO-029-ABC質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進DF-1細胞進行病毒拯救,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染72 h后的細胞上清禽白血病病毒P27抗原呈陽性;將陽性細胞上清,接種新的DF-1細胞培養(yǎng)3 d,P27抗原ELISA檢測、特異性PCR和間接免疫熒光試驗均呈陽性,表明成功構(gòu)建了ALV-J HB2015029感染性克隆,并拯救具有感染性的髓細胞瘤型ALV-J,命名為rHB2015029。 

【文章來源】：畜牧與獸醫(yī). 2020,52(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

rHB2015029的IFA檢測結(jié)果

先用MluⅠ、EcoRⅠ分別酶切TOPO-029-A、TOPO-029-B,將A片段連接入TOPO-029-B片段,構(gòu)建TOPO-029-AB質(zhì)粒;再用KpnⅠ、SalⅠ分別酶切TOPO-029-AB和TOPO-029-C后,將C片段連接入TOPO-029-AB,構(gòu)建TOPO-029-ABC,陽性克隆用M13通用引物進行檢測和酶切鑒定(如圖1)。酶切反應均采用50 μL體系,即:10×CutSmart 5 μL,核酸內(nèi)切酶 Mul I-HF和EcoR I-HF各1.5 μL或KpnI-HF和Sal I-HF各1.5 μL,對應的質(zhì)粒2 μg,補去離子水至50 μL。1.5 轉(zhuǎn)染與拯救

基因組克隆

【參考文獻】：
期刊論文
[1]J亞群禽白血病病毒GDHX01株分離與基因序列分析[J]. 阮灼豪,謝婷婷,王歸燕,莫國東,馮敏,張細權(quán).  中國家禽. 2018(21)
[2]J亞群禽白血病病毒誘導免疫抑制及其相關信號通路研究進展[J]. 郭衍冰,曹利利,董航,姚新華,苑淑賢,姜旭,宋建臣,賈立軍,姚琳,程榮華,邵洪澤,許志林.  動物醫(yī)學進展. 2019(01)
[3]禽白血病研究進展[J]. 李浩然.  養(yǎng)禽與禽病防治. 2017(01)
[4]髓細胞瘤型J亞群禽白血病病毒四川株SCGS-1的分離鑒定及前病毒cDNA重組質(zhì)粒的構(gòu)建[J]. 林艷,趙揚,夏靜,鄒年麗,文心田,曹三杰,黃勇.  中國獸醫(yī)學報. 2013(08)
[5]1株髓細胞瘤型J亞群禽白血病病毒感染性克隆的構(gòu)建與病毒拯救[J]. 林艷,夏靜,鄒年莉,郭明萍,王富妍,趙揚,文心田,曹三杰,黃勇.  畜牧獸醫(yī)學報. 2013(05)
[6]J亞群禽白血病病毒分離株HLJ09SH01株感染性克隆的構(gòu)建及其致病性研究[J]. 紀曉琳,王琦,高玉龍,王永強,秦立廷,祁小樂,高宏雷,王笑梅.  中國預防獸醫(yī)學報. 2013(01)
[7]蛋雞J亞群禽白血病病毒3′非編碼區(qū)序列特征分析[J]. 高玉龍,贠炳嶺,秦立廷,潘偉,王永強,高宏雷,祁小樂,王笑梅.  畜牧獸醫(yī)學報. 2012(11)
[8]我國近10年雞白血病流行病學報道與研究分析[J]. 王洪進,張青禪,趙冬敏,柴家前,常維山,崔治中,郭慧君.  中國獸醫(yī)學報. 2011(02)
[9]我國部分地區(qū)蛋雞群ALV-J及與REV、MDV、CAV混合感染檢測[J]. 秦立廷,高玉龍,潘偉,鄧小蕓,孫芬芬,李凱,祁小樂,高宏雷,劉超男,王笑梅.  中國預防獸醫(yī)學報. 2010(02)
[10]黃羽肉種雞J亞群白血病病例診斷初報[J]. 張丹俊,潘孝成,趙瑞宏,王少林.  中國畜牧獸醫(yī). 2008(02)

博士論文
[1]髓細胞瘤相關A和K亞群禽白血病病毒分離株的生物學特性[D]. 梁雄燕.長江大學 2018



本文編號：3220278